吴天玉，刘湘鄂,许 海

(1.荆州市第三人民医院 妇科,湖北 荆州434000；2.荆州市第三人民医院 泌尿外科,湖北 荆州434000;3.湖北中医药大学黄家湖医院 妇科,湖北 武汉430070)

顺铂是其主要化疗药物之一，克服耐药在子宫内膜癌临床治疗中至关重要。有研究报道，非编码RNA在子宫内膜癌细胞对紫杉醇[1-2]、卡铂[3]耐药机制中发挥重要作用，FOXD2-AS1与微小RNA(miR)-185-5p相互作用，调节结直肠癌细胞细胞的增殖，迁移和侵袭[4]。肌腱同源盒1蛋白 (SIX1)在子宫内膜中异常表达，是人类子宫内膜癌的生物标志物[5]。但lncRNAFOXD2-AS1在子宫内膜癌中的作用机制尚不清楚，探讨lncRNA FOXD2-AS1通过调控miR-185/SIX1分子轴参与子宫内膜癌细胞对顺铂敏感性的分子机制，为临床化疗耐药寻找新的治疗靶点和分子标志物。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

DDP(货号：P4394)、兔源单克隆SIX1抗体(货号：HPA001893)购自Sigma公司；BCA蛋白试剂盒(货号：354234)购自上海恒斐生物科技有限公司；GAPDH抗体(货号：ab181602)、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔(货号：ab205718)单抗均购自abcam公司；DMEM培养基(货号：10567014)购自Gibco公司；ECL化学发光试剂盒(货号：P0018S)购自碧云天生物技术有限公司；显微镜购自上海炳宇光学仪器有限公司；化学发光成像系统购自美国Bio-Rad公司。

1.2 细胞培养

人子宫内膜癌HEC-1-B细胞和正常子宫内膜HESC细胞均购自中科院上海细胞研究所，将HEC-1-B、HESC细胞培养于DMEM培养基(含10%胎牛血清)，在37℃、5% CO2恒温培养，当细胞融合80%左右时，用胰蛋白酶消化进行传代，细胞处于对数生长期进行后续实验。

1.3 子宫内膜癌DDP耐药细胞株[6]构建

取对数生长期的HEC-1-B细胞，调整浓度为1×107个/ml，DDP开始作用浓……