于晓甜 张晓坤 高晓艺 杨洪鸣 唐金宝（潍坊医学院药学院，潍坊261053）

标记免疫分析技术是将抗原-抗体结合反应的特异性和各种标记物的可测量性相结合的分析技术，标记抗体是该技术中不可或缺的重要试剂［1-2］。目前，基于交联抗体分子内活性氨基酸残基的化学共价偶联技术是抗体标记的主要技术，但由于抗体表面上存在的多个活性位点（如1个IgG分子表面有86个-NH2）都可能参与偶联，一旦偶联反应的氨基酸残基位于Fab端，则影响抗体与抗原的结合，导致标记后抗体的抗原结合活性降低［3-4］。因此，开发一种特异性偶联抗体Fc位点的抗体标记技术，对于保持标记后抗体的抗原结合活性具有重要意义。蛋白A能通过疏水作用结合兔、人及小鼠等多种动物IgG的Fc段，根据这一特性，除广泛应用于动物血清IgG和单克隆抗体纯化外，还被多种标记物（过氧化物酶、碱性磷酸酶、胶体金等）偶联标记用于免疫测定［5-6］。Z亲和肽是源于蛋白A的IgG结合结构域，分子量为7 kD［7-8］。本研究以密码子扩展修饰蛋白质技术（aminoacyl-tRNA synthetase/suppressor tRNA，aaRS/tRNA）将含有光敏基团的非天然氨基酸（4-苯甲酰基-L-苯基丙氨酸，p-benzoylphenylalanine，Bpa）引入Z亲和肽的氨基酸序列，并在其C-端重组引入碱性磷酸酶，构建带光敏基团的ZBpa-AP重组蛋白，利用Z亲和肽与IgG-Fc的亲和特异性以及Bpa的共价键形成能力，实现碱性磷酸酶对抗体Fc位点的共价偶联标记，以期为构建一种新型的酶标抗体奠定实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料pTXB1、pEVOL-pBpF质粒分别购自NEB公司和Addgene公司；Bpa购自广州氪道公司；His-Trap Chelating HP购自Amersham Biosciences公司；……