陈熙，曹轶林，唐澄海，邱小芬，林高娟，赵慧玲，邓恋

(广西壮族自治区南溪山医院肿瘤二科，广西 桂林 541002)

0 引言

宫颈癌在妇女恶性肿瘤居第二位，是严重威胁女性健康，呈年轻化趋势，治疗关键点是及早发现、及早治疗且阻止其转移。上皮一间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在恶性肿瘤的早期侵袭和演进过程起到重要的作用[1]，其中的间质分子标志物巢蛋白(N-cadherin)在多种恶性肿瘤组织中的表达异常与肿瘤的转移及患者的不良预后密切有关[2-4]。本研究采用免疫组化方法，检测宫颈癌中N-cadherin的表达情况，并分析其与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 标本的采集

随机选取广西南溪山医院2011年1月至2013年1月确诊的80例初治宫颈癌患者，患者年龄25 ～68岁，中位年龄48岁。入选条件：病理学诊断为宫颈癌，从未接受过任何治疗；根据2002年国际妇产科联盟(FIGO)分期标准：FIGO分期为ⅡB期35例。ⅢA期29例，ⅢB期10例，ⅣA期5例，ⅣB期1例。其中鳞癌78例，腺癌2例。患者平均年龄44.5岁，病灶平均直径4.2 cm。所有患者均进行常规检查以及必要的特殊检查。所有患者签署知情同意书。随机选取30例正常宫颈组织病理标本作为对照组。本次研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2 检测方法

应用免疫组化法检测间质标志物巢蛋白在宫颈癌组织中的表达，并随机选取30例正常宫颈组织病理标本作为对照组。用鼠抗人单克隆神经钙黏蛋白(N-cadherin)单克隆抗体，sp试剂盒及DAB底物显色剂均购自北京中杉金桥公司。采用免疫组织方法，先石蜡组织切片→脱蜡→酒精水化→抗原修复，后阻断内源性氧化物酶活性(用3%过氧化氢)，再予鼠抗人N-cadherin单克隆抗体滴加，4°过夜，加快速型第二抗体。DAB显色后自来水充分冲洗→复染→脱水→树胶封片→镜检。

1.3 结果判定

由病理学专家协助完成结果判定。N-cadherin阳性染色定位于细胞膜及细胞质近细胞膜处，细胞膜呈线状棕黄色或细胞质有棕黄色颗粒为具体表现。综合染色强度和阳性细胞率进行半定量处置：在(×200)的显微镜下，取阳性表达率比较集中互不重叠的视野。细胞计数时不显示标本患者的临床病理资料。结果判断：着色强度以多数阳性细胞呈现的染色强度计分：呈浅黄色及无明显颗粒为1分；呈黄棕色及可见明显颗粒为2分；呈深棕色并可见明显颗粒或浓染颗粒为3分。计数阳性细胞数占细胞总数的百分比，>75%为4分，51%～75%为3分，26%～50%为2分，5%～25%为1分，0%～4%为0分。两者得分相加后计总分：4～7分为强阳性(++～+++)、2～3分为阳性(+)、0～1分为阴性(-)。

1.4 治疗方法

80例患者中有60例患者接受化疗和放疗综合治疗模式，有20例患者由于各种原因无法化疗而单用放疗治疗。化疗方案为顺铂+5-FU联合：顺铂30 mg/m2，静滴，1～3d；5-FU500 mg/m2，静滴6h，1～5d，21d为一疗程，完成4个疗程。放疗采用直线加速器，常规分割外照射+后装腔内照射治疗，外照射5次/周，1.8～2.0Gy/次，宫颈剂量：50Gy；后装腔内照射每周1次，每次A点剂量500cGy，共4～5次。

1.5 统计学处理

用SPSS 13.0统计软件对数据进行c2检验，以P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化检测中N-cadherin在宫颈癌组织与正常组织中的表达(表1),对照组30例正常宫颈组织的N-cadherin阳性率26.67%，强阳性率0%。宫颈癌组织中的N-cadherin阳性率92.5%，强阳性率65%，阳性表达显著高于正常宫颈组织的N-cadherin, 差异具有统计学意义(c2=49.834,P<0.001)。

表1 免疫组化检测中 N-cadherin在宫颈癌组织与正常组织中的表达

图1 不同病例中N-cadherin的表达(×200)

2.2 N-cadherin表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系(表2)。

表2 N-cadherin表达与80例宫颈癌患者临床病理特征的关系

本研究N-cadherin表达与宫颈癌病理分级、临床分期有关，而与淋巴结转移、年龄无关。在宫颈癌不同分化程度组织中，高级别组N-cadherin阳性表达率98.08%，低级别组82.14%，差异有统计学意义(P<0.05)；FIGO分期Ⅲ～IV期N-cadherin阳性表达率97.78%显著高于Ⅱ期85.71%，差异有统计学意义(P<0.05)；淋巴结转移组N-cadherin阳性表达率100%，淋巴结未转移组90.63%，差异无统计学意义(P>0.05)；以45岁为分界点的年龄段表达差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 生存分析

以完成全程治疗作为随访起点，本研究随访时间为6～72个月，以5年生存率作为观察指标，观察宫颈癌组织中间质标志物巢蛋白(N-cadherin)的表达与5年生存率的关系。N-cadherin强阳性52例，5年存活人数19人，5年生存率OS 36.53%，N-cadherin阳性22例，5年存活人数17人，5年生存率OS 77.27%，N-cadherin阴性6例，5年存活人数6人，5年生存率OS 100%，Log-rank 检验结果显示，3组预后比较差异有统计学意义(c2=15.384P<0.01)。三组之间有统计学意义，阴性组生存曲线高于弱阳性，弱阳性高于强阳性组，说明宫颈癌N-cadherin表达阳性与生存率呈负相关。

3 讨论

间质标志物巢蛋白(N-cadherin)是神经型钙黏附蛋白，作为一种介导细胞间黏附、迁移作用的Ca2+依赖性跨膜蛋白，依赖钙在细胞轴附中发挥作用，有亲同种抗原的特性。N-cadherin与上皮-间质转化(EMT)有主要关系，在上皮组织中的N- cadherin 异位表达能够影响上皮细胞的形态和行为，诱导其向间质转化[5]，研究证实，N-cadherin 的异常表达将增强肿瘤细胞侵袭迁移能力，促进细胞间相互作用，在肿瘤的进展及转移中发挥了重要的作用[6]。研究显示在多种恶性肿瘤中N-cadherin存在突变与异常表达，它与恶性肿瘤的发生、发展及预后有相关性[7-10]。

图2 N-cadherin高表达组和低表达组之间总生存率(overall su1-vival，OS) 差异具有显著性

本研究结果显示，N-cadherin在宫颈癌中表达显著增强甚至强阳性表达，正常宫颈组织中不表达或弱阳性表达，差异具有统计学意义(c2=49.834，P<0.001)。有报道在口腔鳞癌中N-cadherin高表达，且高表达与肿瘤分化程度、TNM分期密切相关[11]。在本研究中N-cadherin的表达与宫颈癌的临床分期、组织学分级有关，表明其与肿瘤失分化、浸润性生长明显相关。与淋巴结转移以及年龄无关。范琼等报道N-cadherin表达参与宫颈癌浸润和淋巴结转移相关[12]。本研究可能是标本数量有限或由于都是FIGO分期分组(入组患者均未做手术)而非术后病理分期，有可能有些N-cadherin表达阳性患者盆腔已有淋巴结转移，而CT或MRI未能检查出来，导致结果显示N-cadherin表达与淋巴结转移无关。N-cadherin高表达与多种恶性肿瘤转移预后相关[13-16]，kamikihara等[17]在胃癌的临床病理研究，发现N-cadherin独立于上皮钙轴蛋白的表达，对胃癌的预后有重要的参考价值。N-cadherin在宫颈癌是否存在同样的情况，本研究发现N-cadherin表达水平与总生存率存在负相关性，宫颈癌N-cadherin强阳性患者5年生存率显著低于N-cadherin阳性及阴性患者，预后不佳。当然临床还需更大样本的研究以提供更明确可靠的结论。

总而言之，N-cadherin在宫颈癌中表达增强甚至多数强阳性表达，表明其在宫颈癌发生、发展、浸润中有一定作用，对预后生存有一定影响，可为宫颈癌的诊断和医疗提供一种新的有效指标，有望成为治疗宫颈癌的潜在分子靶点，为宫颈癌早期诊断、治疗和预后判断提供参考依据。