邓斌，张玉笙，林美专，康书鹏，许镇文

（广东省普宁市中医医院骨科，广东 普宁 515300）

1 实验用动物及相关材料

20只普通级3月龄雄性新西兰兔（湖南太平生物科技有限公司，证号：SYXK（湘）2020-0005；），RIPA细胞裂解液（北京普利莱，C1053）；BCA蛋白定量试剂盒（BCA Protein Assay Kit）等试剂。

实验用中药配方（厂家：广东一方制药有限公司，广东省普宁市中医医院中药房提供）：丹参颗粒剂20g、制附子颗粒剂10g、 熟地颗粒剂20g、 巴戟天颗粒剂15g 及仙茅颗粒剂10g等提取生药 。

2 实验方法

2.1 兔子膝关节炎造模

常规石膏绷带固定造模方法，伸直位6w固定兔左后膝关节，定期检查石膏，防止松动、脱落，要求DR片证实造模成功。

2.2 动物给药处理及取样方法

正常对照组和模型对照组的兔子用等量的生理盐水灌胃，模型+补肾活血方组的兔子用等量的中药（7.56mL/kg/d）灌胃，灌胃给药6w，在灌胃时，管子先插10cm左右，再用管子的另一端伸入准备好的水中，看兔子在呼吸时管子中的水柱是否会跟着呼吸迅速上升或下降，如果不行，拔出重置。也可以在伸入5cm左右先用水验证，验证方法同上，再通过回抽验证，验证方法为如果注射器中回抽的气体比较多，且负压不大，则拔出管子重复之前操作，如果回抽的气体比较少，且负压比较大，则可以注入中药。

取各组兔子左腿膝关节软骨，股骨髁部软骨用于做HE检测，胫骨上端软骨各取半分别做WB检测和PCR检测。

2.3 HE染色

HE染色常规步骤逐步处理组织，最后镜检。

2.4 qPCR检测

收集各组兔子膝关节软骨组织，用Trizon裂解法提取RNA，经浓度测定后，通过逆转录得到cDNA，再用基因相应引物和荧光定量试剂盒上样进行相对表达量测定。……