陶 玲，曹 旸，纪光燕，晏汐蓓，王秋兰，罗顺珍，纪光玉，高丽霞，纪开萍

（景洪宏臻农业科技有限公司，云南 景洪 666100）

黑牛肝菌 [Phlebopus portentosus(Berk.&Broome)Boedijn]，又名暗褐网柄牛肝菌，隶属于牛肝菌目（Boletales） 小牛肝菌科（Boletinellaceae） 脉柄牛肝菌属（Phlebopus）。分布于斯里兰卡、越南、印度尼西亚、泰国、巴西、墨西哥、澳大利亚、新西兰等泛热带地区，国内广西、海南、云南等地也有分布[1-3]。

黑牛肝菌与大多数牛肝菌的生长方式不同，其可以脱离宿主树形成子实体。目前，黑牛肝菌已被成功驯化，并实现了日产6 t的工厂化周年栽培[4-5]。

菌丝生长是食用菌人工栽培的关键阶段。在其他的食用菌中，部分维生素及生长调节剂能够促进菌丝生长[6-15]。以往对黑牛肝菌菌丝生长的相关报道中，主要是对适宜碳源、氮源、无机盐或培养条件进行的筛选[16-18]，尚未较全面地对维生素及生长调节剂的促进作用进行研究。研究在黑牛肝菌常用固体琼脂培养基（M1）中添加不同浓度的维生素及生长调节剂，并从生长速度和菌落形态方面观察分析其对黑牛肝菌菌丝生长的影响，以期为黑牛肝菌人工栽培技术的改进提供理论实践基础。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

试验菌株来源于景洪宏臻农业科技有限公司黑牛肝菌杂交菌株YL1701-2。

1.2 培养基制备

M1培养基：去皮马铃薯200 g煮至软而不烂，过滤，葡萄糖20 g、酵母膏2 g、硫酸镁1 g、磷酸二氢钾1 g、琼脂20 g，定容至1 000 mL。

在 M1 培养基中分别添加 0.05 g·L-1、0.10 g·L-1、0.50 g·L-13种不同浓度的维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、烟酰胺、维生素C及生长调节剂6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、吲哚-3-乙酸（IAA），每个处理6个重复，以不添加维生素及生长调节剂为对照。

将上述培养基于121℃，灭菌20 min备用。

1.3 接种与培养

活化后长满平板的黑牛肝菌菌丝母种，使用0.4 cm打孔器取菌块，分别接种于上述培养基，置于30℃恒温培养箱暗培养。培养至5 d、10 d、15 d、20 d时，以十字交叉法测量菌落直径，计算菌丝生长速度，并于第20天观察记录菌落形态特征。

1.4 数据分析

试验数据使用DPS分析软件进行LDS差异显著性检验。

2 结果与分析

2.1 VB1对黑牛肝菌菌丝生长的影响

VB1对黑牛肝菌菌丝生长的影响情况见表1。

由表1可知，添加VB1含量为0.05 g·L-1时，黑牛肝菌菌丝的生长速度和菌落形态均明显优于其他浓度。随着使用量增加，生长速度变缓，色素加重。

表1 VB1对菌丝生长的影响统计Tab.1 Statistics on the influence of VB1on mycelium growth

2.2 VB2对黑牛肝菌菌丝生长的影响

VB2对黑牛肝菌菌丝生长的影响情况见表2。

如表2所示，添加0.50 g·L-1的VB2后，黑牛肝菌的菌丝生长速度优于其他处理。从菌落形态看，不同浓度的VB2均能减少黑牛肝菌菌丝产生色素，长势更好，边缘更整齐。

表2 VB2对菌丝生长的影响统计Tab.2 Statistics on the influence of VB2on mycelium growth

2.3 VB6对黑牛肝菌菌丝生长的影响

VB6对黑牛肝菌菌丝生长的影响情况见表3。

如表3所示，浓度0.50 g·L-1的VB6对黑牛肝菌菌丝生长速度有显著的促进作用，且菌丝长势最好。不同浓度处理后，菌落均不吐水，但是菌落边缘偏不齐。

表3 VB6对菌丝生长的影响统计Tab.3 Statistics on the influence of VB6on mycelium growth

2.4 烟酸对黑牛肝菌菌丝生长的影响

烟酸对黑牛肝菌菌丝生长的影响统计见表4。

由表4可知，添加不同浓度的烟酸后，黑牛肝菌菌丝生长速度在培养10 d后均高于对照。添加量为0.05 g·L-1时，菌落形态最优。

表4 烟酸对菌丝生长的影响统计Tab.4 Statistics on the influence of niacin on mycelium growth

2.5 烟酰胺对黑牛肝菌菌丝生长的影响

烟酰胺对黑牛肝菌菌丝生长的影响统计见表5。

由表5可知，培养至20 d时，添加烟酰胺浓度为0.05 g·L-1时，菌丝生长速度显著高于对照，在其他处理和测量时间点时，生长速度均未显著高于对照。添加浓度为0.50 g·L-1时，对菌丝生长速度有明显抑制作用。各浓度处理在菌落形态上也未显示出明显优势。

表5 烟酰胺对菌丝生长的影响统计Tab.5 Statistics on the influence of nicotinamide on mycelium growth

2.6 VC对黑牛肝菌菌丝生长的影响

VC对黑牛肝菌菌丝生长的影响统计结果见表6。

表6 VC对菌丝生长的影响统计Tab.6 Statistics on the influence of VC on mycelium growth

如表6所示，添加0.50 g·L-1的VC后，对黑牛肝菌菌丝生长有明显促进作用，生长速度和菌丝长势显著高于其他处理，且菌落色素较少，边缘整齐。

2.7 6-BA对黑牛肝菌菌丝生长的影响

6-BA对黑牛肝菌菌丝生长的影响统计见表7。

由表7可知，添加0.05g·L-1的6-BA，对黑牛肝菌菌丝生长有一定的促进作用，菌落色素较少，不吐水，且边缘整齐。但随浓度的增加，对菌丝生长速度会产生明显的抑制作用。

表7 6-BA对菌丝生长的影响统计Tab.7 Statistics on the influence of 6-BA on mycelium growth

2.8 IAA对黑牛肝菌菌丝生长的影响

IAA对黑牛肝菌菌丝生长的影响统计见表8。

由表8可知，IAA对黑牛肝菌菌丝生长有显著的抑制作用，而且浓度越高抑制作用越强，浓度为0.50 g·L-1时菌丝不能生长。

表8 IAA对菌丝生长的影响统计Tab.8 Statistics on the influenceof IAA on mycelium growth

2.9 最佳浓度维生素及生长调节剂对菌丝生长速度影响的比较

各种添加剂最佳浓度对菌丝生长影响的比较情况见表9。

由表9可知，在M1培养基中分别添加适宜浓度的6种维生素和2种生长调节剂后，除IAA外，其他物质对黑牛肝菌菌丝生长速度、吐水、菌丝长势、边缘整齐度等均有一定的促进作用，培养20 d后添加适宜浓度的VB1和VC后黑牛肝菌菌丝生长速度和长势明显优于其余维生素和生长调节剂，IAA则对菌丝生长有抑制作用。

表9 各种添加剂最佳浓度对菌丝生长影响的比较Tab.9 Effects of additives at optimal concentration on myceium growth

3 讨论与结论

研究结果显示，除IAA外的添加剂均可促进黑牛肝菌菌丝生长速度、菌丝长势、菌落颜色、吐水情况、菌落边缘整齐度。其中，添加0.05 g·L-1的VB1和0.50 g·L-1的VC后，菌丝生长速度和菌落形态明显优于其他维生素和生长调节剂。所有试验浓度的IAA均对菌丝生长有抑制作用。

在张冰冰等[20]的报道中，曾指出VB1在和不同氮源结合使用时，对黑牛肝菌菌丝生长的影响差异显著，与酵母膏、牛肉膏、氯化铵结合时会抑制菌丝生长，与硝酸铵结合时显著促进菌丝生长；并认为可能是因为菌丝在无VB1的添加或添加量较少时，菌丝已完全利用前3种氮源。

但本研究中，在使用相同浓度酵母膏作为氮源的前提下，添加 0.05 g·L-1和 0.10 g·L-1的 VB1均对黑牛肝菌菌丝生长产生了不同程度的促进作用。经过对比试验方法后，发现张冰冰等[20]的研究中，采用25℃暗箱培养14 d后测量菌落直径，而本研究采用牛肝菌菌丝常用的30℃暗箱培养，并在5 d、10 d、15 d、20 d时测量菌落直径，计算生长速度。因此，不同培养温度和时间可能是造成试验结果存在差异的主要原因。

据报道，研究中所涉及的维生素，对其他食用菌的菌丝生长也有一定促进作用，如VB1是美味牛肝菌（Boletus edulis Bull.：Fr.）菌丝生长最适培养基[7]；VB1、VB2、VB6、VC对菌丝生长均有促进作用[21]；烟酸、叶酸、VB1和 VB2对斑玉蕈 （Hypsizigus marmoreus） 菌丝生长均有一定的促进作用；VB1、VB2、烟酸对平菇（Pleurotus ostreatus） 生长发育有显著影响，且3种维生素同时添加时，平菇菌落长势最佳[22]。维生素是生物体内多种代谢关键酶及辅酶的重要成分，参与蛋白质、多糖及脂类的代谢，这也可能是维生素对食用菌菌丝生长具有促进作用的原因[22]。

另一方面，植物生长调节剂对其他食用菌菌丝生长也会产生一定的促进作用。如2 mg·L-1～20 mg·L-1的 6-BA、KT、GA3、IBA 和 5 mg·L-1～20 mg·L-1的NAA对大球盖菇（Stropharia rugosoannulata） 菌丝生长均有极显著的促进作用[15]，2，4-D-丁酯（≤10 mg·L-1）和IAA（≤2 mg·L-1）对羊肚菌（Morchella esculenta）菌丝生长也有不同程度的促进作用[16]等。试验中6-BA对黑牛肝菌母种菌丝生长有促进作用，但IAA却显示抑制作用，可能是由于黑牛肝菌本身会产生一定量的IAA，再加上外源添加后，IAA过量而产生抑制作用[23]。

通过研究添加维生素及生长调节剂对黑牛肝菌菌丝生长的影响，维生素对菌丝生长有很大促进作用，母种培养时菌丝长势、生长速度等得到改善。