黄怡芳，吕洁婷，陈绵绵，程昌勇,宋厚辉

(浙江农林大学 动物科技学院/动物医学院 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室，浙江 杭州 311300)

单核细胞增多性李斯特菌(Listeriamonocytogenes，简称单增李斯特菌)是一种人畜共患革兰阳性菌，该菌适应低温、低pH、高盐等应激环境并通过被污染的食物如肉类、海鲜、乳制品和蔬菜水果等传播给人类[1-3]。李斯特菌感染后可引起肠胃炎、败血症、脑膜炎及孕妇的流产，受感染患者的病死率高达30%[4-5]。因为单增李斯特菌的高致死率及全球范围内中毒性病例的频发，所以预防李斯特菌病对于公共卫生安全具有重大意义[6]。

作为一种胞内寄生菌，单增李斯特菌有多个关键毒力因子参与感染细胞的过程。首先通过菌体蛋白内化素A(InlA)和内化素B(InlB)与细胞表面的受体结合，实现菌体对宿主细胞的黏附、侵袭[7]。细菌进入细胞后被吞噬泡内化，在hly基因编码的李斯特菌溶血素O(LLO)和2种磷脂酶(PlcA和PlcB)的参与下，溶解吞噬泡的双层膜结构，从而逃逸进入细胞质开始复制和增殖[8-9]。其中，PlcB(由lmo0250编码)作为重要毒力蛋白之一，在单增李斯特菌感染、吞噬体逃逸、激发宿主机体免疫反应中发挥着至关重要的作用[10]。

单增李斯特菌在感染过程中能够通过操纵相关信号分子通路或调控宿主相关蛋白来逃逸机体的免疫应答[11-12]。基于此点，本研究通过同源重组的方式构建plcB基因缺失株及含plcB的酵母双杂交诱饵质粒，为筛选与毒力因子PlcB相互作用的宿主蛋白提供依据和工具，为进一步深入了解李斯特菌逃逸宿主天然免疫的机制奠定基础。……