高亚桃，王紫燕，马亚宾，蒋桂娥，倪俊卿，张明勇，李 妍，武二斌，秦建华*，赵月兰*

(1.河北农业大学 动物医学院，河北 保定 071001;2.河北省畜牧良种工作站，河北 石家庄 050061；3.怀来县畜牧水产局，河北 张家口 075400;4.张家口市畜牧技术推广站，河北 张家口 075000)

牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease complex，BRDC)是一类多病原多因素的传染性疾病，可引起牛肺炎、运输热、支气管炎等病症[1]，引发该病的病原种类繁多，包括牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus，BRSV)、牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus stype 3,BPIV3)、牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhoea virus，BVDV)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida，Pm)、肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae，Kp)、牛支原体(Mycoplasmabovis,MYPB)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimiahaemolytica，Mh)等[2-6]。近年来，该病在国内外常见报道，多呈地方性或散发性流行，严重危害养牛业的发展[7]。此外，此病多病原混合感染的病原种类增加、病原体之间的相互作用，可导致病症加重、病情复杂，使得该病的诊断和治疗更加困难，给养牛业造成巨大的经济损失[8]。为了解河北省部分地区规模化奶牛场BRDC病原种类，本试验自河北省不同地区不同牛场奶牛呼吸道疾病临床病例采集病料，进行病原的分离和鉴定。

1 材料与方法

1.1 引物的设计与合成根据GenBank公布的 BVDV、IBRV、BRV、BPV、Pm、Kp、MYPB和Mh参考基因组序列，利用 Primer5 软件设计8对特异性引物，由上海生物工程股份有限公司合成。引物序列信息见表1。

表1 引物序列信息

1.2 被检样品自河北省张家口、秦皇岛、保定、衡水、沧州、石家庄、邯郸等地区规模化奶牛场采集奶牛呼吸道疾病临床病例鼻拭子样品及死亡奶牛的肺脏组织样品，共计56份。……