兰春燕 李海南 王 磊 戴利军 邵佳芬 高华方,* 马 旭

1.国家卫生健康委科学技术研究所(北京，100081)；2.北京协和医学院研究生院；3. 广东三九脑科医院

胶质瘤是最常见的原发性颅内中枢神经系统肿瘤[1]，约占颅内恶性肿瘤的80%，其中胶质母细胞瘤(GBM)是恶性程度最高的胶质瘤，患者病情发展隐匿，即使经过最积极的治疗，中位生存期仅为15个月[2]。研究表明，不同性别的患者驱动GBM发展的过程及对治疗反应方面存在差异，且年龄也是GBM预后的重要评判指标[3]。Ohgaki等[4]对751例不同年龄组GBM患者的研究发现，年龄<50岁GBM患者的生存期为8.8个月；而年龄≥50岁组GBM患者的生存期为4.1个月，即年龄≥50岁的晚发GBM患者的预后比中青年患者差[5]。多项研究致力于从基因层面探寻胶质瘤的新的治疗靶点[6-7]，但由于蛋白是细胞生物学功能的直接执行者，因此蛋白组学是分析GBM相关疾病的强有力的工具[8]。本研究采用蛋白组学技术对不同年龄段女性GBM患者的差异表达蛋白进行分析，寻找与年龄相关的差异表达蛋白，并通过生物信息学分析为不同年龄段GBM女性患者的靶向诊疗提供思路。

1 资料与方法

1.1 临床资料

纳入广东省三九脑科医院2018-2020年收治的18例GBM女性患者为研究对象，患者中位年龄49岁(20～71岁)。其中年龄<50岁10例；≥50岁8例。本研究获得广东三九脑科医院伦理委员会的批准，患者或家属均知情同意并签署知情同意书。本研究符合《赫尔辛基宣言》。

1.2 样本制备与数据采集

所有组织样本均通过手术或活检的方式取自GBM患者脑部肿瘤病变区域。18例GBM活检组织均从-80℃冰箱取出，进行样本预处理。蛋白提取后，采用Bradford蛋白定量试剂盒进行蛋白浓度的测定，并通过凝胶电泳实验对条带清晰度等的判断进行蛋白质检。取120μg蛋白样品经胰蛋白酶酶解，采用18C除盐柱进行除盐后，进入质谱仪内上机检测。采用数据依赖采集(DDA)的方式进行真实谱图库的构建。使用配有Nanospray FlexTM(ESI)离子源的Q ExactiveTMHF-X 质谱仪进行数据的采集，设定离子喷雾电压为2.5kV，离子传输管温度为320℃，质谱全扫描范围为m/z 350-1500，使用高能碰撞解离(HCD)方法碎裂进行二级质谱检测。下机后的文件直接导入到Proteome Discoverer 2.2软件进行数据库的检索及蛋白的定量分析。

1.3 统计学分析

使用Excel软件筛选在所有GBM样本中均表达的蛋白。……