余 米，谌颖莲，曹 敏,2，周 梦，曾德军

(1.重庆市药物种植研究所,重庆 408435；2.特色生物资源研究与利用川渝共建重点实验室， 重庆 408435)

日本医蛭(HirudonippnicaWhitman)为《中国药典》收录品种[1]，其含有高效抗凝血物质—水蛭素，同时具有抗血栓、抗凝、降血脂等功效，是心脑血管疾病药物的主要动物原材料[2]。日本医蛭的人工养殖是获取日本医蛭药物原材料的主要途径，但其人工繁殖是产业发展的瓶颈，解析日本医蛭繁殖相关分子机理对提升其人工饲养效率及突破其人工繁殖瓶颈具有重要意义。温度是影响日本医蛭繁殖和生长的主要环境因子，不同温度条件下日本医蛭生理状态存在明显差异。日本医蛭繁殖需要适宜的环境温度，目前关于温度对蛭类的影响研究仅限于繁殖性能和抗冻方面[3-5]，研究表明低温能够刺激宽体金线蛭的性腺发育[4]，但温度对日本医蛭的繁殖情况影响分子机制尚不明确，阻碍了对日本医蛭繁殖相关分子机理的认知和应用。本研究通过设置不同的饲养温度(18℃为日本医蛭的繁殖适宜温度，6℃为日本医蛭的深层休眠温度)，对日本医蛭进行饲养，利用转录组测序[6]及实时荧光定量PCR技术检测不同温度梯度下日本医蛭头部、环带和肌肉组织中的基因转录本的表达情况，对进一步了解日本医蛭繁殖的分子机理，加速其人工繁育，提高生产力具有重要意义，同时挖掘出更多与繁殖相关的基因，为深入研究日本医蛭的繁殖分子机理提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

40尾日本医蛭来自重庆市药物种植研究所日本医蛭繁育基地，体质量为1.425～2.304 g，体长9.8～ 10.52 cm。……