聂彩清,艾连中,熊智强,张汇

(上海理工大学 医疗器械与食品学院,上海食品微生物工程技术研究中心,上海,200093)

嗜热链球菌胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)是嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)在生长代谢过程中向细胞壁外分泌的一种糖类化合物[1]。EPS可以改善发酵乳制品的流变性、质构、持水性等品质[2-4],还具有抗氧化和抗菌[5-6]、抗肿瘤[7]、修复肠道生理屏障[8]等生理活性。EPS的功能与结构密切相关,对其结构的阐明是研究其功能性的基础。单糖组成分析是解析碳水化合物结构的重要过程之一。然而,嗜热链球菌EPS产量低(50～400 mg/L)[9],结构复杂且难与培养基、菌体等分离,直接测定难度较大,通常需进行分离纯化处理,其中,除蛋白是纯化EPS的基础。目前,反复冻融法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法和酶法是除蛋白的常用方法[10]。

现有研究表明,嗜热链球菌EPS是由不同单糖组成的杂多糖,单糖的主要类型包括葡萄糖、半乳糖和鼠李糖,此外,还发现有岩藻糖、核糖、葡萄糖醛酸、N-乙酰半乳糖胺、N-乙酰氨基葡萄糖等[1,3]。因此,嗜热链球菌EPS单糖组成的分析,需要实现多种单糖同时在线检测。高效阴离子交换色谱(high performance anion exchange chromatography,HPAEC)法具有无需衍生、高灵敏度、线性范围宽、色谱柱分离高效等特点,并可实现多种单糖同时在线检测[11],因此被越来越多地应用于复杂多糖的单糖组成分析。如乐胜锋等[12]考察了色谱柱和淋洗液梯度,建立了芦荟多糖中岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和木糖的测定方法;FELZ等[13]通过HPAEC法实现了对组成好氧污泥颗粒中EPS的单糖组成的分析。……