王玲丽,刘同杰,张兰威,公丕民,易华西

(中国海洋大学 食品科学与工程学院,山东 青岛,266000)

糖尿病为全球流行病[1],胰高血糖素样肽-1(GLP-1)通过竞争性抑制胰高血糖素的释放可起到降低血糖的效果,但二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV,EC3.4.14.5)可快速降解GLP-1,不利于其降血糖[2]。DPP-IV抑制肽可通过竞争性结合DPP-IV抑制其活性[3]。DPP-IV抑制肽通常含有脯氨酸,该结构特点为筛选或合成DPP-IV抑制肽提供了靶点。牦牛乳酪蛋白富含脯氨酸[4],牦牛乳酪蛋白的木瓜蛋白酶水解物DPP-IV抑制率可达53.95%[5]。传统方法对蛋白酶的筛选具有盲目性,借助生物信息学手段有望实现对利用牦牛乳酪蛋白制备DPP-IV抑制肽蛋白酶的快速筛选[6]。此外,酪蛋白的高级结构阻碍了其与酶的结合,不利于肽段释放。超声波频率高、波长短,可一定程度影响酪蛋白结构,使酪蛋白更易与蛋白酶结合,从而提高酶解效果[7]。超声波辅助单酶水解已应用于生物活性肽的制备,但与多酶水解的联合作用尚未见报道[8-9]。

本研究首先利用生物信息学方法对牦牛乳酪蛋白进行模拟酶切,筛选制备DPP-IV抑制肽的蛋白酶,并对单酶和多酶组合水解效果进行研究,确定最佳蛋白酶组合。进一步利用超声波预处理技术对组合酶水解过程进行优化,确定制备DPP-IV抑制肽的最佳工艺。本研究可为利用牦牛乳酪蛋白生产DPP-IV抑制肽,实现我国牦牛乳的高值化利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 主要实验原料与试剂

牦牛乳酪蛋白,甘肃华羚乳品股份有限公司；蛋白酶,丹麦Novozymes公司。……