董弦弦,吴晓江,张钰龙,巫小丹,万茵,刘成梅,付桂明*

1 (食品科学与技术国家重点实验室(南昌大学),江西 南昌,330000)2 (南昌大学 食品学院,江西 南昌,330000)3 (南昌大学 国际食品创新研究院,江西 南昌,330000)

单宁酶(tannase,EC 3.1.1.20),又称单宁酰基水解酶,可以催化水解单宁中的酯键与缩酚羧键生成葡萄糖、没食子酸等化合物[1-2],被广泛应用于食品、动物饲料、速溶茶、酿造、制药等工业领域[3-6]。单宁酶是一种胞外诱导酶,由真菌、细菌等多种微生物诱导产生,如GOVINDARAJAN等[7]使用阴沟肠杆菌进行液态发酵产酶,并进行发酵条件优化,其单宁酶酶活力为2.26 U/mL；SHARMA等[8]以茶渣作为发酵底物,使用黑曲霉固态发酵产酶,30 ℃下培养96 h后,单宁酶酶活力达1.86 U/g,并探究其在番石榴汁中的应用。目前主要选择丝状真菌作为单宁酶的工业化生产菌株,但存在产酶活力低、生产成本高的缺点[9]。因此,采用诱变选育技术提高菌株单宁酶产量是降低生产成本的可行途径。常见的诱变方法有紫外诱变[10]、N+注入[11]、甲基磺酸乙酯[12]等,但这些诱变方法存在对操作人员有危害、突变库容量小、菌种遗传稳定性差等缺点。

常压室温等离子体 (atmospheric room temperature plasma,ARTP)是一种新型微生物诱变育种技术[13],具有安全性高、突变率高等优势,目前已经成功应用于细菌、放线菌、真菌、微藻等近60种微生物[14]。例如,LIU等[15]采用ARTP诱变技术与实验室适应性进化相结合的方法,提高了凝结芽孢杆菌的pH耐受性和细胞膜通透性；毛斌等[16]为获得高产中性蛋白酶菌株,使用ARTP对米曲霉进行处理,筛选得到1株高产突变株,其中性蛋白酶活力提高21.0%。……