朱光平，陈日萍，薛晨晨，白洁，范宏亮，吴南翔

杭州医学院（浙江省医学科学院），浙江 杭州 310013

由于抗生素的普适性和全球微生物的流动性，环境中抗性菌（antibiotic resistant bacteria，ARB）/抗生素抗性基因（antibiotic resistance genes，ARGs）大量产生且广泛蓄积，促使“超级细菌”的产生，对生态稳定和人类健康造成了巨大的潜在危害［1］。近年来，ARGs 的去除成为研究的热点问题［2］。ARB 作为ARGs的主要载体，菌体特有的细胞壁为ARGs 在各种不利环境中提供了“保护”，导致常规的水处理技术如紫外照射、氯化消毒、臭氧氧化等需消耗大部分剂量用以去除细菌细胞壁、细胞膜，极大地影响了其对ARGs的去除效果［3］。研究表明，超声能通过机械冲击、空化作用等破除细菌结构［4-5］，而过氧化氢（又称双氧水，H2O2）是水处理工艺中常用的氧化剂，其产生的HO·可对细菌的ARGs片段造成破坏，通过文献查阅发现，多数研究中H2O2的使用剂量比较大［6-7］。对此，本研究拟引入超声法以尽可能减少细菌细胞壁、细胞膜等的影响，联合传统的H2O2去除技术，以期在较低的H2O2浓度范围内探究超声联合H2O2对水中菌内四环素抗性基因tetA、tetR的去除效果，为发展新的、更高效节能的ARGs去除工艺提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器

Hieff UNICON® qPCR SYBR Green Master Mix（抗体法，Low Rox）（上海翊圣科技有限公司，中国），KOD OneTMPCR Master Mix（东洋纺生物科技有限公司，日本），GeneRed Nucleic Acid Dye、高纯度质粒大提试剂盒、血液/细胞/组织基因组DNA 提取试剂盒（TIANGEN，中 国），pMD-19T（Simple）、DNA Ligation Kit Ver.2.1（Takara，日本），30%（质量分数）H2O2（分析纯）（生工生物工程股份有限公司，中国），牛肝过氧化氢酶（2 000～5 000 U·mg-1）（Sigma，美国），超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司，中国），荧光定量PCR 仪（Applied Biosystems，美国），扫描电子显微镜（JEOL，日本）。……