方耀威,许志亮,王亚红,高胜兰,吴 铿,刘 刚*

(1广东医科大学附属医院临床研究中心,湛江 524000;2广东医科大学附属医院心内科;*通讯作者,E-mail:gangliu11@gdmc.edu.cn)

肺纤维化是一种预后极差的慢性肺部疾病,其发病机制尚未清楚。近年来,肺纤维化的发病率和病死率也逐渐升高。虽然已上市的吡非尼酮和尼达尼布能延缓肺纤维化的进程,但作用有限,因此仍迫切需要更有效的药物来满足临床的治疗[1]。

转化生长因子1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)具有促进组织纤维化的重要功能[2],TGF-β1通过激活Smad依赖性和非依赖性途径发挥其生物学活性[3]。其中,Smad2和Smad3是促进TGF-β1介导的组织纤维化的两个主要下游调节因子,而Smad7作为TGF-β1/Smad通路的负反馈调节因子,阻断了TGF-β1介导的促纤维化信号[4]。

8-氧鸟嘌呤DNA糖化酶1(8-oxoguanine DNA glycosylase-1,OGG1)是一种DNA修复酶,在氧化应激的情况下,它通过与DNA链上的8-oxoG结合从而启动碱基切除修复(BER)过程[5]。本课题组前期研究[6]发现,OGG1在博来霉素诱导的小鼠肺组织中表达上调,对小鼠肺部组织进行病理切片后,苏木素-伊红(HE)染色发现肺泡结构紊乱并有实变,Masson染色观察发现肺泡间隙有大量蓝色胶原沉积,而敲除OGG1能缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,通过进一步探讨OGG1影响肺纤维化的机制,证实了OGG1与Smad7存在相互作用,但其相互作用的具体区域不明。本实验在前期研究的基础上,通过原核表达系统获得OGG1和Smad7不同截段体蛋白,并在体外进行pull-down检测,进而发现OGG1与Smad7相互作用的具体区域。

1 材料与方法

1.1 仪器

蛋白电泳槽(货号:1658000)、半干转印系统转印槽(货号:1703849)以……