覃晓虹 刘志昂 陆婷婷 杨 溢 董建辉

(中国人民解放军联勤保障部队第九二三医院1 检验科，2 移植科，广西南宁市 530021，电子邮箱：499432680@qq.com)

研究表明，器官移植后容易出现排斥反应，而这是影响移植物能否在受者体内存活及存活时间长短的最主要因素[1]。因此，移植排斥反应的早期诊断也越来越受到重视。微小RNA(microRNA，miRNA)为内源性非编码RNA，其在免疫调节、胚胎发育、肿瘤发生和进展等方面发挥重要作用[2-3]。最近有研究显示，血清miRNA-21表达水平与肾细胞的增殖及凋亡有关[4]。但目前关于肾移植术后患者血清miRNA-21水平与移植肾早期急性排斥反应的关系的研究较少。因此，本研究探讨肾移植术后患者血清miRNA-21表达水平变化及其与早期急性排斥反应的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2019年4月至2020年3月我院收治的78例肾移植术后患者作为研究对象。纳入标准：均为首次行同种异体肾移植术且供受者血型相配，淋巴细胞毒试验呈阴性，群体反应性抗体<10%。排除标准：发生严重手术并发症者、多器官联合移植者、重症感染者及其他类型肾病者。根据肾移植术后1个月内是否发生急性排斥反应，将其分为急性排斥组33例和非急性排斥组45例。急性排斥反应的诊断：通过移植肾穿刺病理检查结果、影像学检查结果、实验室检测指标及患者临床症状等综合分析做出判断[5]。急性排斥组中男性19例、女性14例，年龄23～58(36.59±6.07)岁；非急性排斥组中男性27例、女性18例，年龄21～60(35.31±5.59)岁。两组患者在性别、年龄差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。本研究通过医院伦理学委员会审批。

1.2 方法

1.2.1 样本收集：分别于术前及术后1周采集两组患者晨起空腹静脉血5 mL， 2 500 r/min离心15 min分离血清，置于-80℃保存待检。

1.2.2 检测方法：(1)参照TRIzol试剂盒(Life Technologies公司，产品批号：181103)说明书操作提取血清总RNA后，检测样本中RNA浓度及纯度。(2)参照反转录试剂盒(Life Technologies公司，产品批号：190224)说明书进行反转录，反应体系为20 μL，包括2 μL RNA样品、1 μL引物、1 μL反转录酶、1 μL内参引物、0.5 μL RNase 抑制剂 、1 μL dNTP混合物(10 mmol/L)、4 μL 5×RT 缓冲液、9.5 μL不含RNase的 H2O 。反应条件为42℃ 30 s，92℃ 10 min，65℃ 30 s，32℃ 1 min，产物置于-20℃保存。(3)采用实时荧光定量PCR仪(厂家：Life Technologies公司，型号：7900HT)进行PCR扩增，反应体系为25 μL，包括2 μL稀释的cDNA、12.5 μL SYBP Premix EX TaqTMⅡ、2 μL引物、8.5 μL ddH2O 。……