熊建团 ， 顾铃毓 ， 王青青 ， 丁 宁 ， 董小艳 ， 刘达越 ，徐灵博 ， 焦 运 ，4， 姜怡邓 △

（1宁夏医科大学基础医学院，2宁夏医科大学临床医学院，3国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室，宁夏血管损伤与修复研究重点实验室，4宁夏医科大学总医院，宁夏银川750000）

非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一种慢性代谢性综合征，其特征是非酒精性因素引起的肝细胞内脂肪变性［1］，其发病率在我国常见的肝脏疾病中较高［2］。肝脏是同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）合成和代谢的重要调节器官。已有研究表明慢性肝病、肝硬化和肝癌等肝脏疾病患者血浆Hcy浓度显著升高［3］，因此Hcy在NAFLD中的作用日益受到重视。Toll 样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）是人类发现的第1个TLR相关蛋白［4］。作为识别细胞表面病原的分子之一，TLR4 被激发后通过一系列信号转导激活核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB），诱导肝细胞坏死、炎症和纤维化［5］，但TLR4/NF-κB 信号通路是否在胱硫醚β-合成酶（cystathionine β-synthase，CBS）基因杂合敲除（CBS+/-）小鼠NAFLD的形成过程中发挥作用仍需进一步探索。因此，本研究主要探讨TLR4/NF-κB通路对NAFLD的影响，以期为防治NAFLD提供新的研究思路。

材料和方法

1 材料

Avanti J-30I 型高速低温离心机（Beckman Coulter）；超纯水仪（Millipore）；相差显微镜（Olympus）；FTC-3000型实时荧光定量PCR仪（Funglyn Biotech）；电泳仪、电转仪和凝胶成像系统（BIO-RAD）。RPMI-1640 培养基和胎牛血清（Gibco）；RNA 提取试剂盒（北京天根技术有限公司）；逆转录试剂盒和荧光定量PCR 试剂盒（Thermo Fisher Scientific）；抗TLR4 抗体和抗NF-κB 抗体（Abcam）；总胆固醇（total cholesterol，TC）及甘油三酯（triglyceride，TG）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）；蛋白提取试剂盒（北京天根技术有限公司）。

2 方法

2.1 小鼠的饲养及分组 实验动物购于北京维尚利德公司，随机选取4 周龄CBS基因正常（CBS+/+）小鼠（n=6）及CBS+/-小鼠（n=6）均给予高蛋氨酸饮食。……