张柏惠 ， 杨晓倩 ， 邹 翔 ， 曲中原 ， 崔琳琳 △， 郭守东 △

［1哈尔滨商业大学药学院（药物工程技术研究中心），黑龙江哈尔滨150076；2潍坊医学院药学院脂代谢与动脉粥样硬化研究室，山东潍坊261053］

材料和方法

1 主要仪器试剂和材料

LEICA CM1850 冰冻切片机和DHG-9240A 型烘箱（上海精宏实验设备有限公司）；BX51（Olympus）；Axio Vert.A1倒置显微镜（Zeiss）。NaIO4和荧光素-5-氨基硫脲（fluorescein-5-thiosemicarbazide，FTSC）购自Sigma-Aldrich；甘油购自北京诺博莱德科技有限公司；OCT（optimal cutting temperature）包埋液购自Tissue-Tek；青霉素、链霉素、磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline，PBS）、伊红、4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（4'，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）和吐温20 购自索莱宝生物科技有限公司；四季青胎牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司；RPMI-1640 培养液购自Gibco；苏木精购自如吉生物科技公司。

2 动物和细胞

SPF 级8周龄雄性载脂蛋白E 基因敲除（apolipoprotein E-deficient，ApoE-/-）小鼠和 C57BL/6 小鼠各 6只，体重为（22±2）g，均购自北京华阜康生物科学有限公司，许可证编号为SCXK2014-0004。饲料购自购自北京华阜康生物科技有限公司。小鼠RAW 264.7巨噬细胞购自上海博耀生物技术有限公司；小鼠乳腺癌4T1 细胞和人肝母细胞瘤HepG2 细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。

3 主要方法

3.1 试剂配制方法 （1）PBS溶液：配制0.01 mol/L的 PBS，调节 pH 值为 7.4，置于冰箱 4 ℃备用；（2）PBS-T 溶液：取配好的 PBS 以 500∶1 的比例加入吐温20，摇匀；（3）FTSC 工作液：取配好的 PBS 将 FTSC 配制为 100 μmol/L 的 FTSC 工作液；（4）NaIO4工作液：用双蒸水溶解NaIO4，配制成1 mmol/L 的NaIO4溶液；（5）DAPI 工作液：用 PBS 将 DAPI 配制成5mg/L 的工作液；（6）甘油工作液：用配好的PBS 将甘油原液配制成1 mmol/L 的工作液；（7）苏木精储备液A：1 g 苏木精加入100 mL 无水乙醇，40 ℃微热溶解；（8）苏木精储备液B：取30%的无水氯化铁溶液4 mL 加入1 mL 浓盐酸和 95 mL 蒸馏水混匀；（9）苏木精工作液：在使用时将 A 液与 B 液 1∶1 混合，需过滤后使用，限4 h内使用，4 h后工作液易被氧化变色。……