孙志鹏，许光中，阿民布和，樊 庆，彭吉润，张能维

在全球范围内，肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的发病率、病死率一直居高不下。中国肿瘤登记中心最新公布的癌症统计数据显示：2015年新发恶性肿瘤约429万例，死亡人数约281万；其中肝癌新发病例约46.61万，死亡人数约42.21万例。HCC的发生、进展和转移是多种遗传，表观遗传和信号通路的失调，与肿瘤微环境相互作用的综合作用结果。脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1(apurinic-apyrimidinic endonuclease 1，APE-1)是一种可以发挥DNA修复功能和氧化还原功能的蛋白，可调节肿瘤相关途径的多种转录因子。前期研究表明，APE-1在肝癌组织和细胞中高表达，且其高表达与TNM分期、组织病理分级存在差异。沉默APE-1表达可降低肝癌细胞Hep 3B的增殖活性，提高细胞凋亡率。该研究旨在研究沉默APE-1对肝癌细胞Hep 3B转录组表达谱及TNF信号通路的影响。

1 材料与方法

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1 材料

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组织样本及实验细胞 选取2017—2018年在首都医科大学附属北京世纪坛医院(北京大学第九临床医学院)，胃肠肝胆肿瘤外科行肝细胞肝癌手术患者，共计10例，取肝癌组织(非坏死区肿瘤组织)及癌旁组织(距肿瘤边缘2 cm肝硬化组织约0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm)。所有新鲜组织获取后立即转入液氮保存。沉默APE-1表达的肝癌Hep 3B稳定细胞株及其对照由实验室构建后保存。

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主要试剂 总RNA抽提试剂TRIzol、反转录RT-PCR Kit试剂盒、mRNA SYBR Green荧光定量PCR试剂购自美国Thermo Scientific公司；SP-0023-SP免疫组化检测试剂盒购自北京索莱宝公司；TNFAIP3(ab92324，免疫组化稀释比例1∶100)和MAP2K6(ab200831，免疫组化稀释比例1∶100)抗体购自英国Abcam公司。

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2 方法

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转录组高通量测序 针对实验组APE-1沉默表达的Hep 3B细胞，对照组转染空白质粒的Hep 3B细胞，提取总RNA，检测合格后反转录，构建cDNA文库。……