杜记涛，曹建，赵稳，万相斌，李智

0 引言

作为起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，胃癌发病率在我国多种恶性肿瘤发病率中位居前三。受早期症状不明显的影响，多数患者在就诊时已处于晚期[1]。MicroRNA（miRNA）是一类长度约为20～25个核苷酸的内生的非编码RNA，被证实在人类多种癌症中表达失调并且发挥促进或抑制癌症进展的作用[2]。有研究表明miR-325-3p在非小细胞肺癌中发挥抑癌因子的作用，能够抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭[3]。另外也有研究发现miR-325过表达能够改善膀胱癌的化疗耐药[4]。Sun等在关于miR-325-3p和胃癌的研究时发现miR-325-5p在胃癌中表达下调并且能够调节胃癌细胞的耐药[5]。紧密连接蛋白1（claudin 1,CLDN1）为紧密连接蛋白家族的一员，在结构上为跨细胞膜蛋白，在不同组织和细胞中存在差异性表达[6]。据国内外研究发现，CLDN1与肺癌、乳腺癌等多种肿瘤的发生存在关联[7-8]。Eftang等[9]发现CLDN1表达增高与胃癌患者生存率降低有关。此外，CLDN1被证实在胃癌组织肿瘤相关成纤维细胞中表达上调[10]。

本研究从影响胃癌进展的生物学网络角度出发，探究miR-325-3p/CLDN1在胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）中的作用机制，以期为胃癌的诊断和治疗提供新的分子靶点。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

人胃黏膜上皮细胞株GES-1以及人胃癌细胞株HGC27、SGC-7901、MKN-45和MGC-803购自中科院上海细胞库；TRIzol试剂盒购自美国Invitrogen公司；反转录试剂盒、SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒均购自日本TaKaRa公司，Western blot实验中抗体均购自英国ABCAM公司；pcDNA3.1（+）质粒购自美国Addgene公司；PGL3基本载体购自美国Promega公司；高糖DMEM培养基及RPMI1640培养基均购自北京索莱宝科技有限公司；……