翟官忠 刘泽林 王清华 柯帅 郭佳

肾癌是人类泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，男性和女性发病率约占全身恶性肿瘤的5%和3%[1]。手术可显著延长早期肾癌患者的总生存期，但肾癌早期诊断困难，确诊时约30%的患者已出现转移。近30%～35%的局限性和局部进展期肾癌患者术后最终会再次复发或转移，预后极差[2]。靶向治疗可以显著改善晚期和转移性肾癌患者的预后，但靶向治疗中的耐药性问题，尚无有效的解决方案[3]。因此，寻找一种新的肾癌生物标志物或治疗靶点对其早期诊断和治疗具有重要意义。近年来，越来越多的微小RNA(miRNA)被发现在肿瘤的进展和转移中发挥重要作用，且与肿瘤细胞的分化、增殖、侵袭、转移和凋亡密切相关[4]。最新报道显示miR-520a-3p在胃癌、卵巢癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中表达下调，并影响其细胞的生物学行为[5-7]。关于miR-520a-3p在肾癌细胞中的表达情况，以及对肾癌细胞生物学行为的影响，尚未见相关报道。本研究采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-520a-3p在肾癌细胞中的表达水平，通过转染上调miR-520a-3p的表达，观察miR-520a-3p对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响，检测相关蛋白表达量变化，并利用生物信息学软件和双荧光素酶报告实验检测其相关靶标。

材料与方法

一、材料

正常肾小管上皮细胞HK2和肾癌细胞系786-O、A498、OS-RC-2及ACHN购自武汉普诺赛公司；RPIM-1640、PBS、Opti-MEM培养液和胰酶购自杭州吉诺公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；miR-520a-3p模拟物、阴性对照序列(miR-NC)、Bcl3-野生型(WT)质粒、Bcl3-突变型(MUT)质粒和引物购自广州锐博公司；……