蒋承耿， 张崇德， 龙友华， 董均兴， 李长权， 杨文钢， 尹显慧， 王忠宇

(1.贵州省烟草公司 六盘水市公司， 贵州 六盘水 553000； 2.贵州大学 农学院， 贵州 贵阳 550025)

引言

【研究意义】烟草是茄科烟草属植物，是我国重要的经济作物之一，近年来，气候变化的影响导致烟草病害逐年加重，新的烟草病害时有发生，烟草细菌性叶枯病是近年发现的一种由成团泛菌(Pantoeaagglomerans)与黄褐假单胞菌(Pseudomonasfulva)引起的新病害[1]，主要危害烟株中下部叶柄，发病严重时叶片从叶柄处开始腐烂脱落，严重影响烟叶的产量和品质。加强烟草细菌性叶枯病的防治方法研究对提升烟叶质量与促进烟草业发展具有现实重要意义。【前人研究进展】云烟99是以云烟85为母本、9147为父本选育而成的烤烟新品种，具有遗传性状稳定、田间生长整齐一致、易烘烤等优点[2]。通过对贵州省盘州市忠义烟区调查发现，细菌性叶枯病在云烟99上发生较为严重，而采用传统化学防治方法容易出现抗性、残留、再猖獗“3R”问题，因此，迫切需要寻求安全高效、经济环保的植保新方法来防治病害。植物免疫诱抗剂是利用生物诱导植物体产生抗性的原理开发的一种新型生物农药，能诱导植物免疫系统启动从而使植物获得或提高对病原菌的抗性[3]，其没有直接的杀菌活性，且用量少，病菌不易对其产生抗性，因而具有良好的应用前景。【研究切入点】关于诱抗剂对烟草叶枯病的诱抗效果目前未见相关报道。因此，有必要开展不同诱抗剂对烟草叶枯病的防控效果研究，明确其防控潜力。【拟解决的关键问题】将室内试验及田间应用相结合，研究 4种诱抗剂对烟草叶枯病的防控潜力，旨在为该病害的防治提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试烟草品种：云烟99，2018年5月15日于贵州大学南区试验大棚内漂浮育苗，7月24日将烟苗移栽至直径和盆高均为15 cm的花盆中，培养至烟株叶数达7～9片叶时进行接种处理，待测。供试菌种：黄褐假单胞菌，由贵州大学农安实验室提供。供试药剂：0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂(碧护，德国阿格福莱农林环境生物技术股份有限公司)，壳聚糖(脱乙酰度≥95%，河南华瑞生物工程有限公司)，0.1%芸苔素内酯可溶性粉剂(硕丰481金满粒，成都新朝阳生物化学有限公司)，0.5%香菇多糖水剂(速停，山东圣鹏科技股份有限公司)。

1.2 试验设计

1.2.1 室内试验

1) 菌悬液配置。参照洪登伟等[4]的菌液配置方法，将供试烟草叶枯病菌菌种在NA培养基上活化48 h，挑取单菌落接种于200 mL NB培养基中，28℃下200 r/min摇床培养至对数期，6 000 r/min离心10 min后去上清液，用无菌水配成悬浊液并稀释至8×108CFU/mL用于接种，现配现用。

2) 诱抗剂处理。共设4个诱抗剂处理，各诱抗剂设置 3个浓度梯度，每个浓度 3次重复，分别为0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂(5 000倍液、10 000倍液、15 000倍液)，壳聚糖(250倍液、500倍液、1 000倍液)，0.1%芸苔素内酯可溶性粉剂(250倍液、500倍液、1 000倍液)，0.5%香菇多糖水剂(400倍液、800倍液、1 600倍液)以及清水对照(CK)。每处理选用 9株长势一致的烟株，按照上述方法分别喷施不同浓度诱抗剂，喷施标准以烟叶表面湿润且有药液滴下为止。分别于2018年8月4日、8月9日喷施诱抗剂处理，共诱导 2次。于8月12日在所有烟株中下部叶柄处针刺接种10 mL浓度为8×108CFU/mL的叶枯病病原菌菌悬液，烟株保湿培养，接种病菌后第10天调查发病情况。

1.2.2 田间试验 于2019年7—9月在盘州市保田烟草种植区进行，种植地块为黄壤，土壤肥力中等，试验地前茬种植烤烟，烤烟叶枯病发生较为严重。以不同诱抗剂为处理对象，共设5个处理，采用室内试验选出的最佳浓度为田间试验施用浓度。 A处理，0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂10 000倍液；B处理，壳聚糖500倍液；C处理，0.1%芸苔素内酯可溶性粉剂1 000倍液；D处理，0.5%香菇多糖水剂800倍液；对照处理，以施等量清水为对照(CK)。每个处理3次重复，共15个小区，随机区组设计。第1次施药于烟草叶枯病发病前(7月6日)，第2次施药于烟草叶枯病发病初期(7月27日)，共施药 2次，施药时对烟株中下部叶片以及叶柄和茎均匀喷雾至烟叶表面有药液滴下为止，于施药后第15天开始调查烟草叶枯病发病情况，间隔10 d调查1次，共调查3次(8月11日、8月26日、9月10日)。

1.3 调查项目及方法

1.3.1 病害调查 调查统计室内试验烟株的病情指数和相对防效以及田间试验烟株的发病率、病情指数和相对防效。病情分级标准：0级，无病；1级，病斑面积占叶片总面积3%以下；3级，病斑面积占叶片总面积3%～15%；5级，病斑面积占叶片总面积15%～35%；7级，病斑面积占叶片总面积35%～55%。

1.3.2 烟株农艺性状调查 采用5点取样法调查田间试验烟株农艺性状，每处理随机5点取样，每点取3株共15株作为自然生长定点观察株，于打顶前调查株高，打顶后采收前测量茎围(在第6叶测量茎围)，节间距(在8叶处测量上下各2节的平均长度)、叶片数、最大叶长和最大叶宽。

1.4 数据分析

采用Excel 2010以及DPS 7.05对数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 诱抗剂对室内烟草叶枯病的诱抗效果

由表 1可知，诱抗剂处理对烟草叶枯病均有诱导抗病效果，不同诱抗剂及其不同稀释倍数下诱抗效果不同。0.136%赤·吲乙·芸苔、壳聚糖、0.1%芸苔素内酯和0.5%香菇多糖分别以10 000倍液、500倍液、1 000倍液和800倍液的诱抗效果最佳，相对防效分别为 68.56%、64.17%、63.08%和57.61%。

表1 不同浓度诱抗剂处理对叶枯病的诱抗效果

2.2 诱抗剂对田间烟草叶枯病的诱抗作用

由表 2可知，4种诱抗剂对烟草叶枯病均有诱导抗病作用，其中以0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂的诱导抗病效果最佳，3个调查时间点平均相对防效为65.53%；其次为0.1%芸苔素内酯和壳聚糖处理，平均相对防效分别为52.38%和51.42%；香菇多糖水剂平均相对防效最差，仅41.20%。在叶枯病发病前期(8月11日)和中期(8月26日)诱抗剂的诱抗效果较好，随着时间推移，烟株叶枯病发病率和病情指数逐渐增加，到叶枯病发病后期(9月10日)，各诱抗剂的相对防效均有所下降，但此时期仍以0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂10 000倍液的相对防效最高，为60.39%。综合各时期烟株发病率及病情指数看，4种诱抗剂的诱抗作用大小依次为0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂10 000倍液>0.1%芸苔素内酯可溶性粉剂1 000倍液>壳聚糖500倍液>0.5%香菇多糖水剂800倍液。

表2 诱抗剂对田间烟草叶枯病不同发病时期的诱抗效果

2.3 诱抗剂处理烟株的农艺性状

从表 3看出，4种诱抗剂处理对烟株农艺性状均有显著影响，其中0.136%赤·吲乙·芸苔处理烟株农艺性状显著优于其他处理，该处理株高、茎围、最大叶长、最大叶宽和节间距分别较对照提高8.89%、11.84%、3.46%、7.24%和4.97%；其次为0.1%芸苔素内酯处理，较好地改善烟株农艺性状。4种诱抗剂处理间烟株株高、茎围差异显著；烟株最大叶长、最大叶宽以及节间距均以0.136%赤·吲乙·芸苔处理效果最优。综上，0.136%赤·吲乙·芸苔以及0.1%芸苔素内酯能较好地促进烟株的生长，改善烟株的农艺性状。

表3 不同诱抗剂处理烟株的农艺性状

3 讨论

烟草细菌性叶枯病是近年来发现的一类烟草新病害[5]，目前田间对于该病的防控多见于化学农药防治，加之烟农存在药剂施用不当、缺乏相应的科学管理知识等问题，长此以往难免产生抗药性、农药残留等问题，因此，必须转换传统化学防治的思路，实行“预防为主、综合防治”的植保方针，而实现这一目标的方法之一就是施用诱抗剂，诱抗剂在低浓度下即可被植物识别为信号物质，诱导植物本身的免疫系统，最终使植物获得抵御病害的能力[6]，此外，还能激发植物体内代谢调控过程，促进植物生长，增加作物产量[7]。0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂含有赤霉素、芸薹素内酯、吲哚乙酸、脱落酸、茉莉酮酸等多种天然植物激素成分，能提高水稻、小麦、葡萄、苹果等多种作物抗逆性，提高作物产量和品质[8-11]；芸苔素内酯属植物生长调节类诱抗剂，具有增产、抗逆、抗病等作用。罗树凯等[12]研究表明，在棉花上施用芸苔素内酯可促进棉花株高、茎围、真叶数以及产量的增加；陈兴江等[13]研究表明，壳聚糖处理对烟草黑胫病具有较好的防控作用，可推迟黑胫病发病时期，延缓发病速率；香菇多糖属于真菌多糖，可诱导植物产生植保素、几丁质酶等抗病性物质，王杰等[14-15]研究发现，香菇多糖和芸苔素内酯对猕猴桃黑斑病具有较好的防效，但对果腐病几乎无防控效果。本试验中0.136%赤·吲乙·芸苔、壳聚糖、0.1%芸苔素内酯和0.5%香菇多糖4种诱抗剂均能诱导增强烟株叶枯病病原黄褐假单胞菌的抗性，能显著降低烟株病情指数，改善烟株农艺性状，但未对诱抗剂的诱抗机理进行分析，有待下一步深入研究。

4 结论

盆栽试验结果表明，0.136%赤·吲乙·芸苔、壳聚糖、0.1%芸苔素内酯和香菇多糖分别以10 000倍液、500倍液、1 000倍液和800倍液对烟草细菌性叶枯病的诱抗效果最佳；田间试验结果表明，0.136%赤·吲乙·芸苔10 000倍液的诱抗效果最佳，对烟草细菌性叶枯病的田间防效为65.53%。4种诱抗剂对烟草叶枯病的诱抗作用大小依次为0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂10 000倍液>0.1%芸苔素内酯可溶性粉剂1 000倍液>壳聚糖500倍液>0.5%香菇多糖水剂800倍液。0.136%赤·吲乙·芸苔可湿性粉剂可作为防治烟草叶枯病的生物药剂加以应用。