APP下载

钙磷浓度对白及种子萌发的影响

2021-08-02杨丽丽莫远琪吴明开

贵州农业科学 2021年5期
关键词:化学试剂种皮子叶

杨丽丽, 刘 海, 刘 筱, 孔 娇, 莫远琪, 夏 与, 吴明开*

(1.贵州省农业科学院 现代中药材研究所,贵州 贵阳 550006; 2.贵州省农业生物技术重点实验室, 贵州 贵阳 550006; 3.安龙县欣蔓生物科技有限责任公司,贵州 安龙 552400)

引言

【研究意义】白及(Bletillastriata)主要采集其块茎干燥后入药,是兰科白及属多年生草本植物[1]。其性苦、甘、涩,微寒,用药历史悠久,具有收敛止血、消肿生肌等功效,主要用于治疗咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒和皮肤皲裂等病症[2],同时也在医药、化工、美容和保健等方面得到广泛应用[3-8]。白及是贵州道地药材,而贵州是典型的喀斯特地貌,基岩中多为可溶性盐类并且极富钙(Ca),同时土壤中磷(P)多数以难溶态存在,可以被植物直接吸收利用的有效磷含量低。因此,该环境下生长的白及遭受高 Ca、低P的双重胁迫。【前人研究进展】白及种子无胚乳,目前白及组培快繁体系尚不完善[9],前人主要研究不同激素对白及种子的影响,如赵垚等[10]研究了不同植物生长调节剂对白及种子萌发及生长的影响。周雨等[11]研究了不同激素对白及种子无菌萌发生长的影响。【研究切入点】到目前为止,钙、磷不同浓度对白及种子萌发的影响尚未见报道,研究钙、磷不同浓度胁迫下白及种子的萌发情况,对白及在贵州地区的种植和生产具有指导意义。【拟解决的关键问题】探明高钙、低磷对白及种子无菌萌发的影响,揭示白及对岩溶生境高钙、低磷环境的适应机制,为优化白及组培育苗技术提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 材料 白及蒴果采于贵州省农业科学院中药材资源圃,原植物经贵阳中医学院何顺志教授鉴定为兰科植物白及(Bletillastriata)。

1.1.2 试剂 碘化钾(分析纯)、五水硫酸铜、磷酸二氢钾,购自天津市致远化学试剂有限公司;硫酸锰,购自重庆茂业化学试剂有限公司;硼酸、乙二胺四乙酸二钠、肌醇、甘氨酸,购自天津市科密欧化学试剂有限公司;硫酸锌,购自天津市大茂化学试剂厂;钼酸钠,购自天津市化学试剂四厂;氯化钴,购自天津市瑞金特化学品有限公司;硫酸亚铁、氯化钙,购自成都市科龙化工试剂厂;VB1、VB6,购自上海山浦化工有限公司;烟酸,购自上海蓝季科技发展有限公司;硝酸钾,购自重广江川化工有限公司;硝酸铵,购自西陇化工股份有限公司;七水硫酸镁,购自成都金山化学试剂有限公司;6-BA,购自如吉生物科技;NAA,购自北京鼎国生物科技有限责任公司。

1.1.3 仪器MLS-3750 日本三洋(SANYO)全自动高压蒸汽灭菌器(上海道萨生物科技发展有限公司),SW-CJ-1G型单人净化工作台(苏州净化设备有限公司),尼康体视显微镜SM800N。

1.2 培养基制备及培养条件

MS培养基中加入无水氯化钙3.2 g/L,磷酸二氢钾1.7 g/L。配制缺钙的MS培养基,分别加入1/2倍钙、1倍钙、1.5倍钙、2倍钙、2.5倍钙、3倍钙;配制缺磷的MS培养基,分别加入1/8倍磷、1/4倍磷、1/2倍磷、1倍磷、1.5倍磷;将配制培养基置于121℃条件下高压蒸汽灭菌20 min,冷却待用。

1.3 果实预处理

将流水冲洗成熟未开裂的白及蒴果沥干,在超净台上分别利用75%乙醇溶液、8% NaClO溶液进行表面消毒1 min、10 min,再用无菌水冲洗4~6次[12],然后用灭菌剪刀在白及硕果上开小口。

1.4 种子培养

将预处理的果实用镊子夹紧蒴果表面,轻轻将粉末状的种子均匀抖落至培养基表面,放置入温度(25±1)℃、光照度1 200 lx、光/暗周期为12 h/12 h的环境下培养。期间观察白及种子形态以及萌动期和发芽期的动态。

2 结果与分析

2.1 白及种子形态

肉眼下白及种子极小,黄褐色。10倍显微镜下呈两端稍尖的纺锤形,中间有一细小椭圆状的胚,无胚乳。30倍显微镜下种子的胚外层具有透明的种皮,种皮为一层薄壁细胞,细胞透明,无内容物[13],种皮有薄有厚(图1)。

图1 放大10 倍和30 倍的白及种子

2.2 萌动期动态

白及种子接种至培养基后开始吸水膨胀,种胚和种皮膨大。接种5 d时开始明显吸胀,且高钙浓度处理的种子吸胀较快,而低磷浓度对种子吸胀无明显促进作用。接种10 d种子颜色由淡黄色转变为绿色。随着钙浓度的增加白及种子膨胀体积越大(图2);低磷处理条件下,白及种子也在吸胀,逐渐膨大。但各浓度间无明显差距(图3)。由图2、图3可见,接种10 d白及种皮仍完整,白及种子先经历吸胀作用,待其膨大、转绿后突破种皮。白及种子的胚不断膨大,当接种15 d时,部分种子冲破种皮,发育成圆球茎并不断长大,种皮因此沿着长轴被不断撕开,其他部分保持相对完整。

图2 钙处理播种10 d的白及种子(2×10 倍)

图3 磷处理播种10 d的白及种子(2×10 倍)

2.3 发芽期动态

培养至20 d时,大部分种子已突破种皮,并形成子叶,甚至有的圆球茎尾部长出很细的根。由图4可见,在加入2倍钙、2.5倍钙、3倍钙中的幼苗长出第2片子叶。培养至30 d时,在不同磷浓度的培养基中,1/2磷浓度条件下长出第2片子叶(图5),而低浓度磷对子叶生长起促进作用。

图4 钙处理播种30 d的白及种子(4×10 倍)

图5 磷处理播种30 d的白及种子(4×10 倍)

3 讨论

白及种子自然条件下萌发率极低,应用和开发繁殖技术体系以保护白及资源及开展规模化生产。试验配制缺钙、磷和钙、磷不同浓度的MS培养基培养白及种子,5 d后开始吸胀,第10天白及种子逐渐膨大,但各浓度间无明显差距。说明,萌发10 d是白及种子的膨胀期,适当增加钙浓度可促进白及种子体积膨大,磷浓度对其影响不大,且高钙、低磷处理的种子均发育较快。随着钙浓度的增加,白及种子的吸胀、萌动、发芽均呈明显促进作用,而在试验浓度范围内,随着钙浓度的增加,促进作用越明显。说明,白及种子对于喀斯特地区高钙环境有较好的适应性。低磷处理时,吸胀、萌动期有促进作用,在发芽期1/2倍磷也促进子叶的萌发。说明白及种子对于喀斯特地区低磷环境同样有较好的适应性。因此,贵州喀斯特地区高钙低磷土壤环境适合白及种子萌发。

4 结论

钙、磷不同浓度的MS培养基接种第5天时白及种子均开始明显吸胀,且高浓度钙对白及种子吸胀有促进作用,而低浓度磷对种子吸胀影响较小;接种第10天不同培养基种子颜色由淡黄色转变为绿色;接种第20天不同培养基大部分种子已突破种皮,并形成子叶,甚至有的圆球茎尾部长出很细的根。在加入2倍钙、2.5倍钙、3倍钙培养基中的幼苗长出第2片子叶;1/2磷培养基中长出第2片子叶。适当增加钙浓度可促进白及种子无菌萌发后子叶生长,且随着钙浓度的增大子叶生长加快;适当减小磷浓度可促进子叶生长。

猜你喜欢

化学试剂种皮子叶
东北地理所发现PG 031基因具有改良大豆种皮吸水性的应用潜力
食品安全检测实验室化学试剂与耗材的管理
蚕豆发芽趣多多
常用化学试剂的安全存放及分类管理
黄花蒿离体再生体系优化研究
化学反应中水的多种角色
实验室化学试剂规范化管理的探讨
甜瓜红心脆和早皇后再生体系的建立
茄子遗传转化植株再生体系的优化
西瓜出苗障碍及其防止措施