陈希妍 张建新 孔令宇 牛丽丹 李广鹏 朱秀英 石金河

新乡医学院第一附属医院急诊科(卫辉 453100)

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是临床常见的胰腺无菌性炎症，由于其发病机制并不明确，对其有效的治疗方式也较为缺乏，可导致全身炎症反应综合征或多器官衰竭[1- 2]。微小RNA(microRNA, miRNA)是长度约为20- 22核苷酸的非编码RNA，其具有调控靶基因表达的作用，在疾病的发生发展中起到重要作用。研究显示上调miR- 383的表达可抑制AP病程中胰腺腺泡细胞的自噬功能[3]。miR-148a可通过Hedgehog信号通路调节肝星状细胞的自噬[4]，并且死亡患者血清miR-148a相对表达量低于生存患者，提示miR-148a可能与急性胰腺炎患者的预后存在联系[5]。而miR-148a是否可通过调节AP过程中腺泡细胞的自噬而调节炎性因子的释放及腺泡细胞的活性还鲜见报道。本研究以AR42J细胞为研究对象, 利用AP模型，检测miR-148a对AP过程中细胞自噬的影响，为临床AP的治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 细胞

大鼠AR42J细胞购自于美国ATCC细胞库，本研究获本院伦理委员会批准。

1.2 主要试剂

胎牛血清、RPMI1640培养液购自于美国Gibco公司。牛磺胆酸钠盐(TLCs)购自于美国Sigma公司。miR-148a mimics、阴性对照miR-148a、Lipofectamine 2000转染试剂购自于苏州吉玛基因公司。逆转录试剂盒购自于北京全式金生物技术有限公司。Beclin1抗体购自于美国SANTA Cruz公司，LC3抗体购自于美国CST公司，GAPDH抗体购自于美国Sigma公司。

1.3 实验方法

1.3.1 大鼠胰腺AR42J细胞的培养 AR42J细胞培养于的RPMI1640培养液中(含20%胎牛血清，含100 U/mL 青霉素及0.1 mg /mL链霉素)，于37 ℃、5% CO2的无菌恒温培养箱中，2～3 d传代1次，选取对数生长期细胞用于实验。

1.3.2 细胞转染及细胞分组 按照Lipofectamine 2000转染试剂的使用说明，利用Lipofectamine 2000将 miR-148a mimics与阴性对照miR-148a转染至AR42J细胞中。……