岳婷婷

（沭阳铭和医院 检验科，江苏 宿迁 223600）

0 引言

侵袭性真菌感染（IFI）指真菌侵入人体血液或器官组织所引起的感染性疾病，是恶性血液病患者常见的感染类型。流行病学统计显示，患者确诊与临床诊断IFI总发生率约为1.5%～2.5%。活组织标本镜检与病原学培养是临床诊断IFI金标准，不过取样多为侵入性操作，对于恶性血液病患者而言不易耐受，加之培养周期长，常导致治疗时机延误[1]。因此，有必要探寻一种敏感、高效的IFI诊断方法。（1，3）-β-D-葡聚糖检测（G试验）与半乳甘露聚糖检测（GM试验）是临床诊断真菌感染常用实验室方法，文章现择取我院近年收治恶性血液病患者，探究其联合诊断患者IFI的临床价值，具体报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。从2018年2月至2020年3月我院收治恶性血液病患者中择取149例高危/疑似IFI的患者为研究对象。患者中，男82例，女67例，年龄为7～83岁，平均37岁。疾病种类分布：急性髓性白血病46例，淋巴细胞系肿瘤31例，骨髓增殖性肿瘤和（或）骨髓增生异常综合征27例，何杰金氏淋巴瘤19例，成熟B细胞肿瘤13例，成熟T/NK细胞肿瘤8例，其他5例。

1.2 纳入与排除。纳入标准：①病理组织学检查证实为恶性血液病，诊断符合WHO关于恶性血液病的疾病分类（2008年），疾病种类不限；②临床评估证实患者存在IFI危险因素或疑似已经发生IFI，评估参照《血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则》（第五次修订版）；③同期接受：G试与GM试验，临床资料齐全；接受活组织标本镜检或病原学培养，获得明确真菌感染或非感染病理诊断；患者签署知情同意书。排除标准：①疾病诊断与病情评估不符合上述标准；②合并其他恶性肿瘤；③近期抗菌药物预防及治疗史；④近期免疫抑制剂和糖皮质激素用药史；⑤合并免疫缺陷；⑥IFI感染史。

1.3 方法。G试验：采集患者血样3 mL，上机3000 r·min-1速率离心5 min，分离血浆，以购自湛江博康海洋生物有限公司的真菌（1，3）-β-D-葡聚糖检测试剂盒进行检测，采用终点显色基质法。GM试验：样本同法上机离心，提取血清，以丹娜（天津）生物科技有限公司生产的半乳甘露聚糖检测试剂盒进行检测，采用酶联免疫吸附法法。两项检测均严格遵照试剂说明书操作，全程质量控制，检测使用LKM-02-32型动态试管检测仪。

1.4 观察指标与评价标准。G试验以（1，3）-β-D-葡聚糖≥10 pg/mL为阳性标准，GM试验以半乳甘露聚糖≥0.85 μg/L为阳性标准，统计两项试验阳性检出率。以活组织标本镜检或病原学培养结果为金标准，评价两项试验单一诊断及联合诊断恶性血液病IFI的灵敏度与特异度。联合诊断判定标准：两项试验中至少有一项为阳性结果——阳性；两项试验同为阴性结果——阴性。

1.5 统计学分析。以SPSS 21.0软件统计分析，计量资料±标准差表示，t检验，计数资料以率（%）表示，χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

G试验诊断阳性39例，阴性110例。GM试验诊断阳性39例，阴性110例，经过活组织标本镜检或病原学培养，149例患者中确诊IFI（阳性）37例，非IFI（阴性）112例。G试验阳性39例，阴性110例。以此为金标准，G试验诊断IFI假阴性4例，假阳性6例，GM试验诊断IFI假阴性5例，假阳性7例，G试验+GM试验诊断IFI假阴性1例，假阳性4例。经计算，G试验、GM试验与两项试验联合诊断IFI结果见表1。统计显示，以G试验+GM试验诊断IFM的灵敏度、特异度、总符合率、阳性预测值与阴性预测值均高于G试验与GM实验单一诊断。

表1 三种诊断方法的灵敏度与特异度比较

3 讨论

近年，非培养方法诊断IFI受到广泛关注和重视，建立IFI实验室诊断依据也成为临床研究的热点。G试验是非培养诊断IFI常用方法之一，其原理是对（1，3）-β-D-葡聚糖成分进行检测。该物质广泛存在于真菌壁中，是真菌细胞壁上的特有成分，尤其在IFI常见致病菌念珠菌与曲霉菌的细胞壁中含量多，占比超过50%[2]。研究发现，浅部感染状态下，真菌（1，3）-β-D-葡聚糖成分释放较少，体液增高不明显，而当真菌进入深部组织后，免疫细胞被明显激活，大量吞噬细胞吞噬和消化真菌，通过补体溶解等免疫学作用，会不断释放（1，3）-β-D-葡聚糖，造成其血水平明显增高[3]。因此，G试验被视为是诊断深部真菌感染敏感、可行的方法。除适用于念珠菌和曲霉菌外，G试验也适用于检测毛孢子菌、卡式肺孢子菌、镰刀菌等，但不适用于隐球菌和接合菌的检测。不过值得注意的是，纤维素膜血透、静脉输注免疫球蛋白与凝血因子、标本污染、标本暴露于纱布或含有葡聚糖的材料中、使用抗糖类抗癌药、化疗造成黏膜损伤等因素，可能导致（1，3）-β-D-葡聚糖检测出现漏误诊。

GM试验是通过检测半乳甘露聚糖诊断IFI的非培养诊断技术，半乳甘露聚糖是曲霉菌属真菌细胞壁的特异性多糖，会随着菌丝的生长从顶端释放，是研究发现的曲霉菌属真菌感染最早释放的抗原[4]。通过免疫学方法测定患者血清中的半乳甘露聚糖抗原，对于早期发现和诊断IFI具有重要临床价值。不过，对于真菌感染程度轻的患者，近期β-酰胺类抗生素治疗的患者，以及服用过含葡聚糖成分的药物者，GM试验可能出现漏误诊，另外技术误差也可能导致GM试验出现假阳性问题[5]。对此，本研究以G试验与GM试验联合诊断IFI，两者技术原理不同，对菌种的敏感倾向所不同，联合使用优势互补，可以进一步提高对IFI的诊断价值。本研究结果示，两者联合诊断IFI灵敏度97.30%、特异度96.43%，总符合率96.64%，阳性预测值90.0%，阴性预测值99.08%，各项指标均高于G实验与GM实验单一检测各结果，与文献报道结论相符[6]，肯定了联合诊断的价值与优势。

综上所述，G试验与GM实验均可以为临床诊断恶性血液病IFI提供有价值的实验室参考，两者联合使用，可进一步提高诊断准确率，减少漏误诊，从而更好地指导合理用药，促进IFI科学治疗，值得临床推广。