李龙妹，甘紫胭，杨小兵，河文峰，廖桂雅，李秋萍，吴万垠

（广州中医药大学第二附属医院，广东 广州 510370）

扶正抗癌方是广东省名中医吴万垠教授总结的经验方，该方遵循中医整体观和辨证论治理念，目前已作为颗粒制剂广泛用于临床治疗。前期临床研究中，扶正抗癌方联合吉非替尼可延长非小细胞肺癌患者中位疾病无进展生存时间以及中位生存时间[1]；基础研究中，扶正抗癌方可通过AMPKα-IGFBP1-FOXO3α和SAPK/JNK-Sp1通路抑制细胞增殖[2-3]，协同吉非替尼通过Akt-p65-MUC1通路抑制细胞增殖[4]，逆转EMT抑制NSCLC细胞转移[5-7]，激活Caspase-3、Bax诱导NSCLC细胞凋亡[8]，通过cMet通路逆转NSCLC细胞对吉非替尼的耐药[9]。但扶正抗癌方是否可通过阻滞细胞周期抑制增殖未见文献报道。因此，本研究以H460人大细胞肺癌细胞为研究对象，检测扶正抗癌方对细胞增殖和周期的影响，并进一步探讨了扶正抗癌方对miR221-3p、细胞周期依赖性激酶抑制物p27Kip1、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白E（Cyclin E）、细胞周期依赖性激酶2（CDK2）和细胞周期依赖性激酶4（CDK4）的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1细胞 H460人大细胞肺癌细胞（中国科学院细胞库）。细胞培养：37 ℃、5% CO2，RPMI-1640培养基+10% 胎牛血清+100 U/mL的青霉素与100 mg/mL的链霉素。细胞传代：弃旧培养基，PBS冲洗，胰酶消化后，吹打至单细胞悬液，按1∶3传代至新培养皿或按照实验要求进行细胞处理。

1.1.2药物和试剂 扶正抗癌方颗粒（批号：J1708002），广东一方制药有限公司制备，具体方药及药物配制详见文献[8]。GAPDH（D16H11）XP® Rabbit mAb（ 批 号：5174）、CDK2 （E8J9T）XP® Rabbit mAb （批 号：18048）、CDK4 （D9G3E）Rabbit mAb（ 批 号：12790）、Cyclin D1 （E3P5S）XP® Rabbit mAb（批号：55506）、Cyclin E （D7T3U）Rabbit mAb（批号：20808）、p27Kip1（D69C12） XP®Rabbit mAb（批号：3686）均购于美国CST公司；RPMI-1640培养基（批号：8119305）、胎牛血清（批号：10270-106）、胰酶（批号：25200-072）均购于美国Gibco公司；……