陆善词 梁 栋 梁连辉 高文军 蔡常辉

中山市第二人民医院,中山,528447

目前，注射用头孢曲松和口服头孢克肟是全球大多数国家和地区用于治疗淋病的一线药物。因抗生素的滥用和市场监管不足，以及淋球菌易获取外源性耐药基因的特性，近年来，多个国家出现对头孢曲松高度耐药的淋球菌株，甚至出现口服头孢菌素类药物治疗淋病失败的病例[1,2]。NG-MAST基因分型技术是一种可监测特殊菌株的暴发流行、耐药性及菌株进化等情况的有效方法[3,4]。本研究目的是探讨中山市辖区淋球菌对头孢曲松、头孢克肟的耐药性及分子流行病学特征，为临床治疗及预防提供依据。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 菌株收集及药敏试验 淋球菌收集于2017年5月至2018年10月中山市12个淋球菌耐药监测点共193株，菌株经过分离培养、鉴定和纯化后用10%小牛血清保存管冻存于-70℃低温冰箱中。淋球菌基础培养基成分包括英国Oxoid公司GC琼脂粉(批号：2202790)与无菌脱纤维羊血(购自广州迪景公司)。头孢曲松与头孢克肟2种抗生素，以及世界卫生组织(WHO)标准菌株 (WHO G、WHO J、WHO K、WHO L、WHO P)均由中国疾病预防控制中心性病控制中心提供。采用WHO推荐的琼脂稀释法检测菌株对头孢曲松与头孢克肟的药敏值(MIC值)。结果判定标准为头孢曲松MIC<0.125 mg/L为敏感，MIC≥0.125 mg/L为低敏；头孢克肟为MIC<0.25 mg/L为敏感，MIC≥0.25 mg/L为低敏。临床菌株与标准菌株复苏后，经2次传代，用18～20 h新鲜培养物配成0.5麦氏浓度菌悬液，菌悬液再经10倍稀释后接种于含抗生素的琼脂平板上，将平板置于35℃二氧化碳箱培养24～48 h观察结果。每批试验均加入已知MIC值的标准菌株进行全程质量控制。

1.2 DNA提取 淋球菌株复苏经2 次传代后，刮取平板上菌落于无菌生理盐水中制成均匀的混悬液，并调整菌悬液浓度至0.5麦氏单位。Expure-20r全自动核酸提取仪及配套试剂(批号：20180603)由深圳汇研科创生物科技有限公司生产。……