高分辨熔解曲线非标记探针基因分型技术检测恶性疟原虫青蒿素耐药相关K13基因突变方法学的建立*

2021-07-20陈伟忠

检验医学与临床 2021年13期

陈伟忠

广东省潮州市人民医院检验科，广东潮州 521000

疟疾是由疟原虫造成的一种全球性急性寄生虫传染病[1-2]。据世界卫生组织统计，2018年全球发生了2.28亿例疟疾病例，其中以非洲的撒哈拉以南地区感染疟疾的疫情最重[3]。青蒿素是我国科学家从青蒿中发现的新型抗疟药物。以青蒿素为基础的联合疗法(ACT)被广泛用于疟疾临床治疗，成为治疗疟疾的一线药物[4-5]。近年来，恶性疟原虫开始出现了青蒿素抵抗的现象。目前的研究表明，恶性疟原虫第13号染色体上编码的kelch蛋白的基因，即K13基因，其螺旋桨域N458Y、Y493H、R539T、I543T、R561H和C580Y氨基酸替换能够影响原虫体外存活率和体内清除率，该基因单核苷酸多态性(SNP)可以作为监控ACT药物抗性的分子标记[6]。特别是在东南亚地区C580Y被认为是一种主要和富有潜力的衡量青蒿素抵抗的分子标志。通过对这些恶性疟原虫青蒿素耐药相关基因突变的检测，可以评价和预测耐药性情况[7]。

本实验运用的非标记探针法高分辨熔解曲线(HRM)分析技术，不仅可以确定特定等位基因的存在或缺失，还可以检查探针下的整个区域单个碱基差异[8]。该分析方法的主要优点是灵敏度和特异度极高；所有实验反应试剂均在实验前加入管中，以避免开盖造成的实验污染；其检测通量大而成本低，适合临床大批量标本的筛查[9]。