张晋毓,田首元,郭志佳

(山西医科大学第一临床医学院麻醉科,太原 030001;*通讯作者,E-mail:chinatsyjj@126.com)

在衰老的诸多机制中,铁死亡是最近研究的一个热点。铁死亡是铁依赖性的新型细胞死亡形式,其实质是铁离子催化作用下代谢发生异常,导致细胞内氧化还原失衡,诱导细胞死亡[1]。热量限制(caloric restriction,CR)是在保证机体功能的前提下,限制每日总热量摄入的一种措施,被证明能减少氧化应激的发生,延缓老龄相关疾病的发生发展[2]。SIRT1是热量限制作用中的一个关键蛋白,通过抑制SIRT1可以影响热量限制的作用效果[3, 4]。目前,国内外尚无铁死亡和热量限制关系的相关报道,本研究主要通过检测铁蛋白、转铁蛋白等来研究热量限制是否对老年小鼠肝脏的铁死亡有作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物和分组

18月龄雄性C57BL/6J老龄小鼠24只,体质量(323)g,由山西医科大学实验动物中心提供。小鼠适应2-3 d后,采用数字表法随机将其分为3组(n=8)。自由饮食组(AL组):混合饲料喂养,饮水饲料供应充足,保持垫料干燥;热量限制组(CR组):混合饲料分笼喂养,自由饮食1周,计算平均初始每日食量,以后每2周减少初始食量的10%,6周共减30%,建立热量限制模型[5]。SIRT1抑制剂组(SI组):在热量限制模型的基础上,第7周连续腹腔注射0.3 mg EX-527(SIRT1抑制剂,1652-10,Biovision 公司,美国)1周,1次/d[4]。7周后取肝组织检测指标。

1.2 病理学组织染色

肝脏组织4%多聚甲醛固定24 h，梯度酒精脱水，二甲苯透明，浸蜡，石腊包埋，切片厚5 μm，展片，烤片，二甲苯脱蜡，酒精至水，苏木精-伊红染色，或普鲁士蓝染色25 min，核固红染色10 min，中性树胶封片，显微镜观察肝小叶变化，肝细胞脂肪变情况及肝细胞形态结构变化。……