谢云鹏,胡 军,柳 新,刘 兵,于 淼,呼铁民*

(1承德医学院附属医院神经外科,承德 067000;2承德医学院附属医院肿瘤科;*通讯作者,E-mail:cyfysjwk1@163.com)

脑胶质瘤是中枢神经系统最为常见、发病率最高且预后最差的原发性肿瘤之一[1]。临床上治疗手段依然是手术联合放化疗为主,切除不彻底和放化疗药物不易通过血脑屏障成为脑胶质瘤治疗的巨大瓶颈。近年来研究发现,脑胶质瘤的发生发展是多因素、多基因共同参与的结果[2],探究脑胶质瘤发生及发展的分子机制、寻找新的生物治疗靶点已迫在眉睫。Smad7是转化生长因子β(TGF-β)受体激酶底物[3],是Smads家族中3个亚型中的抑制型Smad,Smad7最主要的作用是作为TGF-β信号通路的负调控因子[4]。有研究表明,Smad7还能以不依赖TGF-β1的方式去影响一些参与致癌过程调控的分子的表达和功能[5]。本研究以脑胶质瘤细胞系U-87MG为研究对象,独立于TGF-β信号通路探讨Smad7对脑胶质瘤细胞增殖与凋亡影响的作用机制,为脑胶质瘤的生物靶向治疗提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

人脑星形胶质母细胞瘤U-87MG细胞(赛百慷上海生物公司)。Smad7 siRNA及转染试剂lipofectamine2000(lipo2000)均为美国Invitroden公司产品。PCR引物由上海生物工程有限公司合成,Trizol总RNA抽提试剂盒、第1链cDNA合成试剂盒及PCR扩增试剂盒均购自宝生物工程大连有限公司。Smad7、PCNA、CyclinD1、Bcl-2、Bax、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR及β-actin鼠源单克隆抗体均购于美国Epitomics公司,羊抗鼠二抗购于美国KPL公司。CCK-8购于美国APExBIO公司。细胞凋亡试剂盒购于美国BD公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及转染 脑胶质瘤U-87MG细胞于含10%胎牛血清的1640培养基中,置于5%二氧化碳的37 ℃细胞培养箱中培养。……