王涵，刘卫平，龙乾发，李俊辰，黑悦，刘宇琪，季丞

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种隐匿起病的进行性神经退行性疾病，目前机制尚不清楚；虽然在AD的研究方面已投入巨大，但仍然缺乏有效的预防及治疗措施[1-2]。间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)具有抗炎、免疫调节、血管生成、清除病理蛋白以及基质重构等功能[3]。而间充质干细胞外泌体(mesenchymal stem cell-derived exosome,MSC-EXO)不仅具有与间充质干细胞相似的功能，并且具有更好的安全性[4]。本研究以APP/PS1小鼠作为AD的疾病模型，给予尾静脉注射MSC-EXO处理，通过免疫组织化学染色观察小鼠脑内淀粉样蛋白(amyloid β-protein，Aβ)的沉积，并通过Nissl染色观察海马组织的神经元数量；并对NF-E2相关因子(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2，Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(kelch-like ECH-associated protein-1，Keap1)及血红素氧合酶1(heme oxygenase-1，HO-1)蛋白的表达水平进行检测；以探讨MSC-EXO对海马神经细胞的保护作用及其机制，为AD的治疗提供一种新的思路。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级APP/PS1雄性小鼠以及年龄匹配的野生型C57BL/6小鼠(北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号SCXK(京)2016-0006)，饲养于空军军医大学动物中心，生产许可证号：SCXK(陕)2019-001；小鼠在12∶12白昼交替的环境中自由饮食饮水。本研究方案得到空军军医大学动物伦理委员会的批准。

1.1.2 主要试剂 间充质干细胞专用培养基(友康恒业生物科技有限公司)；4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)(Sigma，D9542-10MG)；兔抗ACTB(Abclonal，AC026)；兔抗Nrf2(Abmart，T55136S)；兔抗keap1(Proteintech，10503-2-AP)；兔抗HO-1(Proteintech，10701-1-AP)；6e10抗体(Biolegend，SIG-39320)；辣根过氧化物酶偶联的羊抗鼠(Thermo Fisher Scientific，A16078)，辣根过氧化物酶偶联的羊抗兔(Thermo Fisher Scientific，A16096)，CD9单克隆抗体(Abcam，ab92726)；TSG101单克隆抗体(Abcam，ab125011)；Alexa FlourTM 594 C5 Maleimide(Invitrogen，A10256)。

1.2 方法

1.2.1 MSC培养及外泌体(exosome,EXO)分离、鉴定 本课题组前期已形成成熟的MSC培养和EXO分离与鉴定的方法[5]。使用干细胞专用培养基培养间充质干细胞，细胞融合至80%时，更换无血清培养基继续培养24～48 h，收集细胞上清，于-80 ℃冻存备用，或者直接进行EXO的分离。……