杜英立，吴翠兰，陆 震，蓝金红★，曾令越，龙爱淑，李 军★，彭 昊

（1.马山县动物疫病预防控制中心 530600；2. 广西兽医研究所 广西兽医生物技术重点实验室 530001；3. 马山县百龙滩镇农业林业和水利站 530618；4. 三江侗族自治县动物疫病预防控制中心 545500）

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida，Pm）是一种人畜共患的革兰氏阴性菌[1]，正常存在于动物的上呼吸道，宿主动物在先天免疫应答受损时(如病毒感染、免疫抑制、应激等)，多杀性巴氏杆菌能够突破扁桃体等机体防御屏障，进入下呼吸道，引起呼吸道疾病和全身感染，临床可见于猪、牛、羊、兔的肺炎，牛和水牛的急性败血症，猪的萎缩性鼻炎和家禽的禽霍乱[2，3]。多杀性巴氏杆菌是引起牛呼吸道疾病综合征的主要病原，病牛表现为咳嗽、喘，精神沉郁、食欲减退、消瘦、呼吸困难等症状。时至今日，该病的发生并未减退，为此，本研究拟对某例病死牛进行病原分离、PCR扩增鉴定和鉴型，并进行药物敏感性、致病性试验，为其防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器

胰蛋白胨大豆琼脂平板培养基、胰蛋白大豆肉汤购自北京陆桥技术股份有限公司；细菌DNA提取试剂盒、2×ES Taq MasterMix等均购自北京康为世纪生物科技有限公司；药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司；细菌微量生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公司；PCR仪、凝胶成像仪购自Biorad公司。

1.2 试验动物

体重为18～22 g的10只健康小鼠，购自广西医科大学实验动物中心。

1.3 引物设计

按吴翠兰等方法[4]合成多杀性巴氏杆菌（Pm）、A（B/D/E/F）型多杀性巴氏杆菌（Pm-A、Pm-B、Pm-D、Pm-E、Pm-F）的引物，引物由上海英骏生物技术有限公司合成，引物序列信息见表1。……