朱华

（江苏省泰兴市第二人民医院检验科，江苏 泰兴）

0 引言

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染所导致的乙类传染病。随着检验技术的不断发展，HIV 抗体检测试剂、方法越来越多。灵敏度、特异性高的检测技术可以大大缩短HIV 检测的窗口期，对HIV 的早期诊断、早控制、早治疗，从而切断HIV 病毒的传播具有极大意义。过去十年里本院HIV抗体检测主要采用ELISA 方法和金标法，但ELISA 方法和金标法受试剂、检测环境、检测人员等多种因素的影响较大，存在诸多的局限性[1]。而化学发光技术具有灵敏度高、干扰少、自动化高、速度快等优点，在HIV 抗体筛查实验室中应用也越来越广泛[2]。本次研究以免疫印迹试验法作为金标准，对两种化学发光的检测结果进行比较，评价两种检测方法在HIV 抗体初筛试验中的价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2019 年1 月至2020 年12 月本院300 例门诊皮肤科及住院输血前体检高危患者，其中男性215 例，女性85 例，年龄18-75 岁，平均45 岁。

1.2 试剂

本次研究电化学发光使用希森美康株式会社生产的人类免疫缺陷病毒抗原抗体检测试剂盒；光激化学发光使用博阳生物科技（上海）有限公司生产的人类免疫缺陷病毒HIV（1+2 型）抗体检测试剂盒。所用试剂均在有效期之内。

1.3 仪器

电化学发光使用HISCL-5000 全自动免疫分析仪、光激化学发光使用LiCA500 自动光激化学发光检测仪。所用仪器性能可靠。

1.4 方法

两种化学发光试验均严格按照各自的试剂使用说明书和仪器标准操作程序(SOP 文件)进行操作和结果的判读。对两种方法检测结果不一致者或初筛试验阳性者，重新采样，双份血清（第1 次采集血清和重采样本血清）、双试剂复检，对任一方法检测阳性的标本和对照标本都按规定并利用免疫印迹法进行确诊试验[3]。

1.5 统计学方法

利用SPSS20.0 软件进行统计学分析，计数资料用例（%）表示，采用χ2检验，检验水准α=0.05，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

300 例样本中，296 例样本的两种方法检测结果均为阴性,使用免疫印迹法确认HIV 抗体阴性。其余4 例疑似样本在进一步确诊实验中，电化学发光法检测结果显示阳性4 例、阴性0 例，光激化学发光检测结果显示阳性2 例、阴性2 例。经确诊实验证实，电发光法假阳性2 例，假阴性0 例；光激化学发光假阳性0 例，假阴性0 例。见表1、2。电化学发光和光激化学发光在HIV 抗体初筛试验中的阳性率对比，差异无统计学意义(P=0.417＞0.05)；光激化学发光检测法阳性率为0.67%(2/300)，特异性为100%[298/（298+0）]，灵敏度为100%[2/（2+0）]，电化学发光法阳性率为1.33%(4/300)，特异性为99.3%[298/（298+2）]，灵敏度100%[2/(2+0)]。光激化学发光、电化学发光的特异性、灵敏度对比，差异无统计学意义（P＞0.05）

表1 300 例患者HIV 抗体检测结果（n）

表2 光激化学发光与电化学发光比较（n）

3 讨论

电化学发光分析是通过电极对含有化学发光物质的某化学体系施加一定的电化学信号(包括电压和电流)，一直产生某种新物质，该物质能与体系中存在的化学物质反应或自身进行分解反应，反应不但提供足够的能量，而且还能产生合适的发光体并接受该反应的释放能量，形成激发态发光体，不稳定的激发态返回基态时便发出与该发光体性质相一致的发射光，用光电倍增管等普通光学手段测量发光光谱或发光强度从而对物质进行痕量分析。具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、重现性好、试剂稳定、操作简单、结果易观察、部分试剂可重复利用的优点[4]。

光激化学发光技术使用的是均相体系化学发光检测技术，参与免疫反应的一个抗体上包被了感光珠(sensibead)，内含酞菁(鲁米诺类化学发光物质)；另一个抗体上包被了发光珠(chemibead)，内含二甲基噻吩衍生物及Eu 螯合物。在目标抗原存在的情况下，可形成夹心免疫复合物，目标抗原可使两个抗体上标记的感光珠和发光珠紧密的连接在一起，在680nm 激发光下，可完成鲁米诺氧途径化学发光过程。整个能量(光)的产生、传递和放大过程十分稳定，不易受到pH 值、离子强度和温度的影响。具有反应时间更短、灵敏度更高、特异性更强的优点[5]。

目前已证实HIV 抗体分为HIV-1 型抗体、HIV-2 型抗体两种亚型，HIV-1 型流行较广泛，呈全球性流行趋势，毒力较强潜伏期较短；HIV-2 型流行性局限，毒力弱，但发病潜伏期较长，比较隐匿，无论HIV-1 型还是HIV-2 型在进入人体后都主要侵犯人体免疫系统，最终导致机体免疫功能缺陷，从而引起各种机会性感染和肿瘤的发生。因此，同时筛查HIV-1 型、HIV-2 型抗体会大大提高HIV 抗体检出率[6]。本次研究中光激化学发光的基础原理是一种均相免疫反应，其所用试剂在均相条件下，采用双抗原夹心免疫光激化学发光检测人血清中的HIV（1+2 型）抗体。而电化学发光是一种异相免疫反应，采用两步法的化学发光免疫分析法，检测HIV-1、HIV-2 型抗体和P24 抗原。患者通常在感染HIV 后6-8 周（窗口期）才产生抗体。同时检测HIV-1、HIV-2 和P24 抗原可缩检测短窗口期，以满足临床的需求。本研究中，光激化学发光和电化学发光的特异性、灵敏度对比，差异无统计学意义（P＞0.05），均适用于HIV 抗体初筛试验，电化学发光的阳性率稍高于光激化学发光，而光激化学发光特异性稍高，可能基于两种方法的原理差异。本次研究中两种化学发光灵敏度均为100%，灵敏度高在HIV 抗体筛查方面更能体现其优势，可以有效降低HIV 漏检带来的风险。根据《全国艾滋病检测技术规范》要求，对HIV 抗体初筛有反应的样本，必须用原试剂双孔或两种试剂进行复检试验[7,8]。此研究中两种化学发光均可选作各自的替代方法进行复检试验。