肖梦珂，华 宇，冯莹莹，路江涛，翟海晖，王天云，贾岩龙

(1.新乡医学院公共卫生学院，河南 新乡 453003；2．新乡医学院药学院，河南 新乡 453003；3．新乡医学院基础医学院，河南 新乡 453003)

中国仓鼠卵巢(Chinese hamsters ovary,CHO)细胞表达系统已被广泛应用于重组蛋白药物(抗体、疫苗)的研发和生产[1]，但应用哺乳动物细胞生产重组蛋白时目的蛋白的表达水平较低以及表达失稳是目前亟待解决的问题[2]。选择合适的启动子对提高重组蛋白的产量具有重要意义。巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子是哺乳动物细胞中驱动重组蛋白表达的最强的启动子之一，启动子的转录驱动是目的蛋白表达的关键步骤[3-4]。研究表明，超级核心启动子(super core promoter,SCP)能够增强基因转录活性，提高目的蛋白表达及其稳定性[5-6]。本研究通过构建不同启动子(CMV启动子、Natural CMV启动子、SCP2和SCP3)驱动的真核表达载体并分别转染CHO细胞，检测启动子对增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)表达及稳定性的影响,为设计表达载体时选择适用于稳定高产重组蛋白的启动子提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞、主要试剂与仪器CHO-K1细胞由本实验室驯化保存。达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbeco′s modified Eagle′s medium，DMEM)-F12购自河南普诺易生物制品研究院有限公司，胎牛血清购自美国Gibco公司，青霉素、链霉素、胰蛋白酶消化液购自上海吉诺生物科技有限公司，Lipofectamine 2000转染试剂购自赛默飞世尔科技(中国)公司，杀稻瘟菌素筛选试剂购自上海生工生物工程股份有限公司，TRIzol Reagent试剂盒、反转录试剂盒购自美国Invitrogen公司；荧光倒置显微镜购自德国……