罗志威，林元山

（湖南农业大学生物科学技术学院，湖南 长沙 410128）

烟草黑胫病（Tobacco black shank）又称烟草疫病，致病菌为烟草疫霉菌，俗称烂腰、黑根，多发于成株期，少数发生在苗床期，其发病率达到5%～20%，严重的达50%以上，我国平均每年因烟草黑胫病造成的经济损失达1亿元以上，仅次于烟草病毒病[1]。烟草疫霉菌的防治方法主要有农业防治（轮作、抗病品种选育[2]）、化学防治[3]（代森锰锌、恶霜灵、肉桂酰胺类杀菌剂氟吗啉、金雷多米尔锰锌）和生物防治[4-5]。农业防治法和化学防治法容易出现农药残留、产生抗药性，单一种植导致抗病品种退化、生态环境失衡等问题[6]。生物防治法具有安全有效、绿色环保的特点，应用前景广阔[7]。为此，笔者进行了烟草疫霉菌拮抗菌的筛选，以期从湖南省烟草种植区土壤中筛选具有烟草疫霉菌拮抗作用的功能菌，为烟草病害的生物防治提供菌种资源。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 烟草疫霉菌 供试烟草疫霉菌由湖南农业大学烟草生物科学与工程技术中心提供。

1.1.2 培养基 （1）LB培养基：胰蛋白胨10.0 g，酵母提取物5.0 g，氯化钠10.0 g，琼脂粉20 g（仅固体培养基），蒸馏水1 000 mL，pH值7.0～7.2。（2）PDA培养基：马铃薯去皮200 g，切碎煮沸30 min，200目筛过滤后定容到1 000 mL，然后加入20 g葡萄糖、20 g琼脂粉。（3）燕麦培养基：燕麦30 g，煮沸1 h后，纱布过滤定容到1 000 mL，然后加入20 g琼脂粉。（4）10% V8汁培养基：美国V8蔬菜汁100 mL与1 g碳酸钙混合均匀，3 000 r/min 离心后取上清液，加自来水定容到1 000 mL，pH自然值。（5）阿须贝无氮培养基：甘露醇10 g，CaCO35 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，KH2PO40.2 g，CaSO4·2H2O 0.1 g，NaCl 0.2 g，琼脂粉20 g，加自来水定容到1 000 mL。（6）解无机磷培养基：(NH4)2SO40.5 g，葡萄糖 2 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，NaCl 0.2 g，CaCO32.5 g，Ca3(PO4)210 g，MnSO40.02 g，FeSO40.02 g，琼脂粉20 g，pH值7.2，加自来水定容到1 000 mL。……