郑 鹏，冯 瑞，秦 雪，李 琦，王春安

（1.东北农业大学动物科学技术学院，哈尔滨 150030；2.黑龙江昇太牧业发展有限公司，黑龙江兰西 151500）

睾丸曲细精管是雄性动物产生配子（精子）的器官，在曲细精管内主要有支持细胞和生殖细胞组成［1-2］。在动物生长发育过程中，支持细胞逐渐发育成熟，形成血睾屏障，使曲细精管内维持一个精子发生的特殊内环境，生殖细胞逐渐分化形成生殖干细胞、不同类型的精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞、精子［3-4］。初情期后，曲细精管内的结构和功能已经基本完善，生精上皮处于不同发育阶段的生精细胞不断分裂，源源不断产生精子。但初情期前，支持细胞形成血睾屏障和生殖干细胞的迁移、增殖与分化的机制还不是很清楚。

为此，本试验选取不同日龄的民猪睾丸，通过制作组织学切片和免疫荧光染色，研究支持细胞发育和血睾屏障形成的形态学变化，为猪睾丸生殖生理的研究和应用提供理论和实践依据，同时为民猪公猪保种提供借鉴。

1 材料与方法

1.1 试验动物及采样

7，30，60，70，90，110日龄民猪，来源于黑龙江昇太牧业发展有限公司兰西县民猪保种场。猪保定后，用碘酒消毒下腹部，无菌取出双侧睾丸，剪去脂肪垫，用37℃生理盐水冲洗睾丸。取睾丸组织小块，迅速放入固定液中固定。固定液包括4%甲醛-PBS和pH值为7.2的2.5%戊二醛。

1.2 光学显微镜的组织学观察与测量

取睾丸组织小块，迅速放入4%甲醛-PBS固定液中固定，24 h后用纱布包好，编号，按照常规的石蜡切片步骤制作切片［5］，对组织切片进行全切片扫描，然后使用CaseViewer 2.4 RTM切片图像处理软件进行观察及测量。……