陈 勇，史利宁，胡毓安，曹 进，孙 宁，姚新月，张 静，王 颖，范 明，王卫萍

0 引 言

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa ，PA)是医院内感染的重要病原菌，随着碳青霉烯类药物的广泛和不合理使用，耐碳青霉烯PA日益增多[1-2]，尤其是多重耐药甚至是泛耐PA的数量和比例迅速上升[3]，给PA所致的感染的治疗带来了极大的困难[4-6]。临床现有可选抗菌药物少，治疗难度高，严重影响患者的转归。由PA所引起的医院内感染达30%[7]，其中呼吸道感染率最高，死亡率可高达61.1%[8]。PA碳青霉烯耐药主要与OprD2孔蛋白缺乏相关[9]。但研究人员对全球碳青霉烯耐药PA的流行病学发现，产碳青霉烯酶的PA所占比例正急剧增高[10]，不同的酶其流行的区域不同。本文收集了泛耐药PA，调研碳青霉烯酶的存在情况，并对其耐药分子机制及其临床分布进行探讨，为预防和控制耐药菌株的传播以及临床治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 菌株来源收集了东部战区总医院2018年7-12月的临床首次分离的泛耐药PA112株，-20 ℃冻存待用。

1.2主要试剂和仪器BHI培养基(英国OXOID公司)、MiSeq测序仪(美国Illumina公司)、DNA Marker2000(上海慧颖公司)、Qiagen Large-Construct Kit(德国QIAGEN公司)、PCR仪(美国ABI公司)、琼脂糖凝胶电泳仪(深圳博伟尔公司)、凝胶成像系统(英国Syngene公司)。

1.3菌株鉴定用16S rRNA进行菌种鉴定，在BHI平板上挑取单个菌落，置于100 μL的去离子水中，100 ℃ 10 min 裂解菌体，13 000×g离心1 min，取上清作为模板，16S rRNA基因扩增参考文献[11]进行，PCR扩增产物送去上海英捷维基公司测序。

1.4碳青霉烯酶的检测及其类型用改良Carba NP 法检测碳青霉烯酶及其类型[12-13]。取甘油菌接种于新鲜的肉汤，37 ℃、200 r/min培养至A600值……