王明金 王爱民 刘春花 张旭 李勇军 王永林 林昌虎

【摘 要】 目的：建立蓖麻叶的质量标准方法，对提升蓖麻叶的质量标准进行研究。方法：采用顯微鉴别方法鉴别蓖麻叶粉末显微特征，建立薄层色谱法对蓖麻叶进行定性鉴别;参考《中国药典》（2015版）通则，对蓖麻叶水分、总灰分、水溶性浸出物进行研究。结果：显微特征明显，叶表皮细胞呈不规则形状，气孔平轴式，直径21～23 μm;导管多为螺纹，直径3～42 μm;草酸钙簇晶较多，直径9～39 μm，有的簇晶排列成行;晶鞘纤维多，直径8～14 μm;纤维散在，直径7～23 μm，壁厚，纹孔明显。薄层色谱结果表明主斑点清晰，分离度好，与对照药材在相同位置处显示相同颜色的斑点。11批蓖麻叶水分含水量平均值为13.85%;总灰分平均值为13.0%;水溶性浸出物平均值为18.0%。结论：该方法稳定、简便可靠，且重现性好，能为蓖麻叶的质量控制提供依据。

【关键词】 蓖麻叶;显微鉴别;薄层色谱法;水溶性浸出物;质量控制

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）08-0040-05

Abstract：Object To establish a quality standard methods of Ricini Folium.Methods The microscopic characteristics of Ricini Folium powder were identified by means of microscopic identification， thin layer chromatography （TLC） method was established for the qualitative identification of Ricini Folium.According to the general rules of Chinese pharmacopoeia （2015 edition）， the water content， total ash content and water-soluble extractives of Ricini Folium were studied.Result Leaf epidermal cells are irregular in shape， and stomata type is plane axis with diameter size of 21 to 23 μm.Spiral vessels with 3 to 42 μm in diameter are observed.Calcium oxalate clusters are numerous with 9 to 39 μm in diameter， some of them are arranged in rows.There are many crystal sheath fibers with a diameter of 8 to 14 μm and the fibers are scattered with thick walls and obvious pits.The results of TLC showed that the main spots were clear with well resolution， and the spots color and Rf value were consistent with the reference herb.The average moisture content of 11 Ricini folium is 13.85%; The average value of total ash is 13.0%; The average value of water soluble extract is 18.0%.Conclussin The method is stable， simple， reliable， and reproducible， which can provide basis for improvement of the quality control of Ricuni Folium.

Key words：Ricini Folium; Microscopic Identification; Thin-layer Chromatography （Tlc）;Water-soluble Extras; Quanity Control

蓖麻叶为大戟科植物蓖麻 Ricinus communis L.的新鲜或干燥的叶。蓖麻为一年生粗壮草本或草质灌木，高达5米;小枝、叶和花序通常被白霜，茎多液汁 [1-2]。蓖麻叶味苦、辛，性平，小毒，具有清热解毒、拔毒消肿、祛风除湿的功效，主要用于治疗风湿麻痹、咳嗽痰喘、子宫下垂、痈疮肿毒等，为贵州少数民族用药[3]。据报道，蓖麻叶中含有含有生物碱、挥发油、萜类等成分[4-8]。蓖麻资源丰富，除了《中国药典》收载的蓖麻子和蓖麻油[9]，蓖麻叶也具有良好的药用价值和应用前景。但是目前关于蓖麻叶的质量控制方法尚不完善，仅收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003版中，质量控制项目简单，仅有性状鉴定。因此，本研究采用显微鉴别法、薄层色谱（TLC）对蓖麻叶进行定性研究，同时检查项增加水分、总灰分以及浸出物，为完善蓖麻叶的质量控制标准提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 50i显微镜及DS-Fi2显微成像系统（日本尼康公司）; REPROSTAR3薄层数码成像系统（瑞士CAMAG）;EL204电子天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司];AE240十万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）;CQ250A-TS超声波清洗机（250 W，频率40 kHz，上海跃进医用光学器械厂）;DK-98-Ⅱ型水浴锅（天津泰斯特有限公司）;WP-ΜP-II-20实验室超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）。

1.2 试药 水合氯醛（AR，国药集团化学试剂有限公司），丙三醇（AR，天津市致远化学试剂有限公司）;氢氧化钾、无水乙醇、甲醇、乙醚购自国药集团化学试剂有限公司，三氯甲烷、乙酸乙酯购自上海申博化工有限公司，硫酸购自重庆川东化工（集团）有限公司，环己烷、磷钼酸、香兰素购自天津市科密欧化学试剂有限公司，石油醚购自科安隆博华（天津）医药化学有限公司，乙酸丁酯购自国营重庆无机化学试剂厂，以上试剂均为分析纯;三乙胺（AR，国药集团化学试剂有限公司）;

青岛海洋硅胶G板（青岛海洋化工厂分厂）;烟台江友黄海硅胶HSG板（烟台江友硅胶开发有限公司）;青岛鼎康硅胶G板（青岛鼎康硅胶有限公司）。

11批的蓖麻叶（批号：20170816、20170816、20170901、20170902、20180701、20180715、20180720、20180722、20180726、20180801、20180803），分别产自贵州贞丰，贵州贞丰，贵州平塘，贵州安顺，贵州镇宁，贵州金沙，贵州兴义，贵州兴义，贵州金沙，贵州盘州，贵州关岭。所有药材经贵州医科大学药学院张旭副教授鉴定为大戟科植物蓖麻Ricinus communis L.[JP+1]的干燥叶，以来自镇宁的样品（批号：20180701）为对照药材，代表性标本保存于贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室。[JP]

2 实验方法

2.1 显微鉴别 蓖麻叶粉碎，过4号筛，挑去少许粉末置载玻片上，滴加蒸馏水、水合氯醛试液（必要时加热透化），盖上盖玻片，置显微镜下观察，记录拍照。

2.2 薄层色谱鉴别 取本品粉末1 g，加无水乙醇10 mL，冷浸20 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取蓖麻叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各1 μL，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇（25∶4∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。

2.3 水分、总灰分、水溶性浸出物测定取本品粉末（过二号筛）2 g，精密称定，照《中国药典》（2015版）通则0832水分测定法（第二法 烘干法）测定[10]102。

取本品粉末2 g，照《中国药典》（2015版）通則2302 灰分测定法（总灰分测定法）测定[10]204，根据残渣重量，计算本品中总灰分的含量（%）。

取本品粉末（过二号筛）2 g，精密称定，置100 mL的锥形瓶中，精密加水50 mL，照《中国药典》（2015版）通则2201浸出物测定法（水溶性浸出物测定法 热浸法）测定[10]202，以干燥品计算本品中水溶性浸出物的含量（%）。

3 实验结果

3.1 显微鉴别结果 经过对多批蓖麻叶进行粉末鉴别试验，对其特有的结构进行总结，其粉末显微结构如图1所示，本品粉末为深绿色。叶表皮细胞呈不规则形状，气孔呈平轴式，直径21～23 μm;导管多为螺纹，直径3～42 μm;草酸钙簇晶较多，直径9～39 μm，有的簇晶排列成行;晶鞘纤维多，直径8～14 μm;纤维散在，直径7～23 μm，壁厚，纹孔明显。

3.2 薄层鉴别结果

3.2.1 系统适用性试验 照上述2.2的方法对蓖麻叶进行薄层色谱鉴别。结果如图2所示，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置处，显相同颜色的斑点。

3.2.2 耐用性试验

3.2.2.1 不同品牌硅胶G板考察结果 为了评价该方法的实用性和可靠性，按拟定色谱条件，分别考察青岛海洋硅胶G板、烟台江友黄海硅胶HSG板和青岛鼎康硅胶G板的展开效果。结果如图3所示，上述三种品牌硅胶G薄层色谱板均能较好的对斑点进行分离。

3.2.2.2 不同展开温度的考察 按拟定色谱条件，分别在20℃、25℃、35℃下展开，相对湿度为50%下展开，考察不同温度对展开的影响。结果如图4所示，不同温度下供试品色谱中，各个斑点清晰，温度在20～35℃均能较好的鉴别蓖麻叶，说明温度对该方法的展开结果影响不大。

3.2.2.3 不同展开湿度的考察 按拟定色谱条件，分别在湿度30%、50%、70%下展开，考察不同相对温度对展开的影响。结果如图5所示，各斑点显示清晰，相对湿度在30%～70%之间均能较好的鉴别蓖麻叶，说明相对湿度对该方法下的试验结果影响不大。

3.2.3 稳定性试验 每天制备一份供试品溶液，连续3 d，室温保存，在第4天再分别制备一份供试品溶液和对照药材溶液，将不同放置时间的供试品溶液点于同一硅胶G板上，展开，显色，以考察供试品溶液的稳定性。对稳定性考察结果如图6所示，供试品溶液在室温下放置72 h稳定性良好。

2.2.4 样品鉴别结果 以镇宁（批号20180701）为对照药材，照建立的薄层色谱鉴别方法对所收集的10批蓖麻叶鉴别结果如图7所示，供试品色谱中，在与对照药材相同位置处，显示相同颜色的斑点。

3.3 水分、总灰分、水溶性浸出物测定结果 照2.3项下方法测定水分、总灰分、水溶性浸出物，分别计算结果，结果见表1。11批干蓖麻叶水分平均含量范围为9.69%～13.8%，平均值为13.85%;总灰分含量范围为8.53%～12.12%，平均值为10.39%;水溶性浸出物含量范围为16.34%～24.48%，平均值为20.51%。

3 讨论与小结

3.1 显微鉴别方法的考察 中药鉴定方法有传统鉴定方法和新技术方法，性状鉴定、来源鉴定、理化鉴定、显微鉴定是传统中药鉴定的主要四类方法，其中显微鉴定是目前中药鉴别的主要方法之一[11-12]。中药显微鉴定是应用显微技术对中药进行分析或鉴定，即应用显微镜对中药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种鉴别方法[13]。此次试验鉴定的为蓖麻叶，属于叶类中药，大部分根、茎、叶、花、果实、根皮、茎皮类均可采用粉末制片法[14]，因此采用粉末制片法对蓖麻叶进行显微鉴定，该方法简单、快速，能清晰有效地观察到蓖麻叶粉末中的特征显微结构，能有效的鉴定蓖麻叶。

3.2 提取条件及展开系统的考察 薄层色谱法是在合适大小的玻璃板上，将硅胶、氧化铝、聚酰胺键等吸附剂制成的固定相均匀的铺在板上，然后将样品溶液点于薄层板上，在适当的展开容器中用合适的展开溶剂展开，当展开到适当距离时取出，显色，最后将所得色谱图同标准物质按同法所得的色谱图比较，用于定性、定量试验[15-16]。此次试验通过对不同提取方法、提取溶剂、提取时间等因素的考察，确定最佳提取条件为本品粉末1 g，加无水乙醇10 mL，冷浸20 min，滤过，取滤液作为供试品溶液，该方法简单易行。同时考察了不同展开剂和检视方法，确定以石油醚-乙酸乙酯-甲醇（25∶4∶0.1）为最终的展开系统，以磷钼酸试液为显色剂，结果显示分离度好，斑点清晰。同时对不品牌的薄层色谱板、不同温度、不同湿度，稳定性进行考察，结果显示该方法可靠、稳定，最终用于11批样品的鉴定，均能较好的鉴定各批蓖麻叶药材。

3.3 小结 本研究所建立的蓖麻叶质量控制方法具有简便、稳定和可靠的特点，显微镜下观察到气孔为平轴式，导管为螺纹，草酸钙簇晶存在于叶肉薄壁细胞中，晶鞘纤维多，纤维散在，同时测量了各组织的直径，以上特征均可作为鉴定蓖麻叶粉末特征的依据;薄层色谱结果显示主斑点显示清晰，且各斑点之间分离度良好，在相同位置与对照药材显示相同颜色的斑点，由此进一步说明所建立的方法稳定、可靠、重现性好，适用于蓖麻叶的鉴别;水分、总灰分、浸出物结果显示11批蓖麻叶水分平均含量范围9.69%～13.8%，平均含量为13.85%;总灰分平均含量范围为8.53%～12.12%，平均含量为10.39%;浸出物平均含量范围为16.34%～24.48%，平均含量为20.51%。因此可暂定水分、总灰分、浸出物分别不得超过15%、13%、18%。11批蓖麻叶的水分、總灰分、浸出物含量存在差异可能与药材的不同产地、不同气候气候、采收时间有关。综上，本实验较为系统的研究了蓖麻叶质量控制方法，并且该方法稳定、简便可靠，能为蓖麻叶的质量控制提供依据。

参考文献

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志第44（2）卷[M]. 北京：科学出版社， 2004： 88-89.

[2]李永康. 贵州植物志第6卷[M].成都：四川民族出版社，1992：92-95.

[3]贵州省药品监督管理局编.贵州省中药材、民族药材质量标准（2003年版）[S].贵阳：贵州科技出版社，2003： 389.

[4]陈月华， 陈利军， 石庆锋. 蓖麻叶挥发油化学成分分析[J]. 信阳农业高等专科学校学报， 2012， 22（3）： 117-119.

[5]黎伸华， 邓青， 朱丽， 等. 蓖麻中的萜类和甾体及抗糖尿病活性研究[J]. 中国中药杂志， 2014， 39（3）：448-452.

[6]邓青， 覃乾祥， 叶觉鲜， 等. 蓖麻的化学成分及其抗糖尿病活性的研究[J]. 华西药学杂志， 2015，30（4）： 442-444.

[7]李楠，黎继烈， 朱晓媛. 蓖麻毒蛋白的研究进展[J]. 中国油脂，2013， 38（6）： 24-27.

[8]曾佑炜， 宋光泉， 彭永宏，等. 蓖麻毒蛋白研究及应用进展（综述）[J]. 亚热带植物科学，2004，33（1）： 60-63.

[9]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[S]. 北京： 中国医药科技出版社， 2015： 351，418.

[10]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（ 四部）[S].北京： 中国医药科技出版社， 2015： 102，204，202.

[11]孙得淼， 王欣然， 王京昆. 中药材鉴定方法概述[J]. 中南药学， 2017，15（4）： 487-491.

[12]雷忠萍， 贺道华， 曹翠兰. 中药显微鉴定常见的几种制片方法[J]. 安徽农业科学，2011，39（4）： 1922-1924.

[13]康廷国. 中药鉴定学[M]. 北京： 中国中医药出版社， 2003： 36.

[14]安丽敏，安丽华. 中药显微鉴定常用制片方法概述[J]. 哈尔滨医药，2016，36（1）：78-79.

[15]罗由萍. 薄层色谱及其在药用植物研究中的应用[J]. 安徽农业科学， 2011，39（6）： 3309-3312.

[16]邓哲， 荆文光， 刘安. 薄层色谱法在当前中药质量标准中的应用探讨[J]. 中国实验方剂学杂志， 2019，25（7）： 201-206.

（收稿日期：2020-10-07 编辑：程鹏飞）