郭金洲 陈海宁 马晶鑫 田维毅 蔡琨

【摘 要】 目的：研究G蛋白偶联雌激素受体GPR30在大豆异黄酮降低ox-LDL导致的EA.hy926细胞氧化损伤时发挥的作用。方法：体外培养EA.hy926细胞，随机分为空白组、模型组（ox-LDL）、雌二醇组（ox-LDL+E2）、大豆异黄酮组（ox-LDL+SIF）、GPR30受体拮抗剂组（G-15预先干预2 h，ox-LDL+SIF）。采用CCK-8法检测细胞生存率，二硝基苯肼显色法檢测LDH活性，ELISA法检测ET-1水平，WST-1法检测SOD活力，TBA法检测MDA含量，qPCR检测HO-1mRNA表达，Western Blot检测GPR30受体蛋白表达情况。结果：与模型组相比，在SIF干预下，细胞存活率升高，LDH活性、ET-1水平和MDA含量均降低，SOD活力和HO-1mRNA表达升高（P<0.01），拮抗GPR30受体后，与SIF组相比，细胞存活率显著下降，LDH活性、ET-1水平和MDA含量均显著增高，SOD活力和HO-1mRNA表达下降（P<0.01或P<0.05），GPR30蛋白表达明显降低。结论：大豆异黄酮可以显著降低ox-LDL引起的EA.hy926细胞氧化损伤，其作用机制可能与结合G蛋白偶联雌激素受体后发挥类雌激素作用有关。

【关键词】 大豆异黄酮;GPR30;ox-LDL;氧化损伤;内皮细胞;植物雌激素

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2021）08-0017-06

Abstract：Objective To studythe role of GPR30 in soy isoflavones（SIF） on human umbilical vein cell fusion cell （EA.hy926） by oxidative damage.Methods EA.hy926 cells were cultured in vitro and oxidized low density lipoprotein （ox-LDL） was induced to form oxidative damage cell model.The cells divided randomly into control group， model group （ox-LDL）， estradiol group （ox-LDL +E2），soy isoflavonesgroup （ox-LDL +SIF）， GPR30 receptor antagonist group（G-15 pre-intervention for 2h， ox-LDL+SIF） .Cell survival rate was detected by cck-8 method， LDH activity was detected by dinitrophenylhydrazine chromography，ET-1 level was detected by ELISA method， SOD activity was detected by WST-1 method， and MDA content was detected by TBA method.mRNA expression of ho-1 was detected by qrt-pcr，protein expression of GPR30 was detected by Western Blot.Results Compared with the model group， under SIF intervention， cell survival rate was increased， LDH activity， ET-1 level and MDA content were all reduced， and SOD activity andHO-1mRNA was increased （P<0.01 ）;Compared with the SIF group，the GPR30 receptor is antagonized，cell survival rate was reduced， LDH activity， et-1 level and MDA content were all increased， and SOD activity andHO-1mRNA was reduced （P<0.01 ），protein expression of GPR30 wasreduced （P<0.01 ） Conclusion The SIFcan significantly reduce oxidative damage of EA.hy926 cells caused by ox-ldl， and the mechanism of action may be related to the GPR30receptor.

Key words：SIF;GPR30;ox-LDL;Oxidative Damage; The Endothelial Cells

现代医学认为动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是多因素共同作用引起的疾病，虽然其发病机制尚不明确。但研究发现，氧化应激是AS发生发展的重要因素[1]，而ROS蓄积增多引起的血管内皮氧化损伤是 AS发病机制的关键环节[2-3]。

G蛋白偶联雌激素受体（G protein-coupled estrogen receptor，GPER/GPR30）作为一种新型的7次跨膜G蛋白偶联雌激素膜受体[4]，在雌激素非基因组效应中发挥主要作用[5]。有报道称，通过调节GPR30降低动脉粥样硬化的发生[6]。以往的研究发现，大豆异黄酮（soy isoflavones，SIF）具有良好的抗氧化损伤作用[7-8]，SIF是植物雌激素的一种，具有类雌激素作用。因此我们推测大豆异黄酮可能通过GPR30介导的类雌激素效应降低内皮细胞氧化损伤。为验证我们的猜想，实验选用ox-LDL诱导EA.hy926细胞构建内皮氧化损伤模型，使用SIF干预损伤模型，观察其抗氧化作用，并观察使用GPR30受体拮抗剂G-15干预后，SIF抗氧化损伤效应的变化，进而探讨SIF抗氧化损伤及其与GPR30的关系。……