董艳 杜安飞 辛本勤 曹佳伟

作者单位：1.日照市妇幼保健院检验科，山东，日照276800

2.日照市莒县中医医院检验科，山东，日照276800

3.日照市中心血站，山东，日照276800

4.青岛市胸科医院检验科，山东，青岛266000

子宫内膜癌（endometrial cancer，EC）是最常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率呈上升趋势［1］。标准治疗包括原发性子宫切除术和双侧输卵管卵巢切除术［1］，为提高复发或转移患者的生存质量，个性化的分子靶向治疗也在进行研究和试验。研究显示胰腺癌中miR⁃32⁃5p 表达上调，并通过下调第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homologue deleted onchro⁃mosome ten，PTEN）表达促进胰腺癌转移［2］。宫颈癌中miR⁃32⁃5p 低表达，miR⁃32⁃5p 通过靶向同源盒B8（homeobox B8，HOXB8）抑制宫颈癌细胞恶性行为［3］。有报道称EC 中miR⁃32⁃5p 高表达［4］，但其在EC 中的作用并未阐明。叉头蛋白N3（Fork head Box N3，FOXN3）是一种转录抑制因子，参与细胞周期调控和肿瘤发生等过程［5］。研究显示FOXN3 在肝癌、肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤中显著下调，上调FOXN3 可抑制癌细胞的上皮⁃间充质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）进程，抑制肿瘤转移，在癌症进展中充当抑癌基因角色［6］。本研究通过Starbase 预测发现，miR⁃32⁃5p与FOXN3可能存在靶向关系。

1 材料与方法

1.1 材料

人正常子宫内膜上皮细胞hEEC 购自北纳生物，EC 细胞JEC 由本院子宫内膜癌患者自愿捐赠，EC 细胞系Ishikawa 和HEC⁃1A 购自美国ATCC；McCoy's 5a 培养基、杜尔伯格伊戈尔培养基（dulbecco's modified eagle medium，DMEM）和胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）购自美国Gibco 公司；引物、miR⁃32⁃5p 模拟物（miR⁃32⁃5p）、miR⁃32⁃5p抑制剂（anti⁃miR⁃32⁃5p）、FOXN3 过表达载体（pcDNA⁃FOXN3）、FOXN3 抑制剂（si⁃FOXN3）和对照（miR⁃con、anti⁃miR⁃con、si⁃con 和pcDNA⁃con）、FOXN3 的野生型（wild type，WT）和突变型（mutant type，MUT）双荧光素酶报告载体购自上海吉玛制药有限公司；FOXN3 抗体、E⁃钙粘蛋白（E⁃Cadherin）抗体、N⁃钙粘蛋白（N⁃Cadherin）抗体和波形蛋白（Vimentin）抗体购自英国Abcam 公司；……