师锐赞，何倚帆，牛亚楠，高 宇，陈 敏，张轩萍

(山西医科大学基础医学院药理学教研室，山西 太原 030001)

乳腺癌是世界范围内的恶性肿瘤，是女性癌症相关的第一大死因，严重危害女性健康。近年乳腺癌的诊治已取得重要进展，但转移和耐药仍是多数乳腺癌患者死亡的主要原因。乳腺癌患者转移灶内肿瘤细胞的耐药性明显增强，治疗棘手，平均寿命仅2-3年[1]。因此，探寻与转移和耐药均相关的关键分子是改善乳腺癌预后的重要举措。

上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule，EpCAM)是表达于上皮细胞的I型跨膜糖蛋白，参与细胞黏附、迁移、增殖和分化等过程，在多种恶性肿瘤(如结肠癌、乳腺癌、前列腺癌等)呈异常表达。EpCAM对肿瘤干细胞的干性维持也有突出意义，是防治恶性肿瘤的新靶点[2]。研究证实[3]，EpCAM过表达是乳腺癌疗效差和预后不良的重要原因之一[3]，但其机制尚未阐明。本研究主要探究EpCAM在乳腺癌转移和耐药中的作用，并探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂胎牛血清(fetal bovine serum, FBS，Cellmax，货号：SA112.02)；乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein，BCRP，Sangon Biotech，货号：D155255)；Transwell 24孔板(Corning，货号：3422)；Matrigel胶(Corning，货号：356234)；EpCAM多抗(Boster，货号：PB1115)；E-cadherin多抗(Boster，货号：PB9561)；N-cadherin多抗(Boster，货号：BA0673)；β-actin单抗(Boster，货号：BM0627)；vimentin多抗(ABclonal，货号：A19607)；β-catenin单抗(Santa Cruz Biotechnology，货号：8480)；active β-catenin 单抗(Cell Signaling Technology，货号：8814)；Lipofectamine 2000(Thermofisher，货号：11668-027)；siRNA序列设计及合成(Public Protein/Plasmid Library，货号：PPL0038-3a/b/c)。

1.2 主要实验仪器恒温培养箱(型号：371)购自美国Thermo公司；倒置显微镜(型号：AE2000)购自厦门麦克奥迪电气股份有限公司；超净工作台(型号：ZHJH-C1112C)购自上海智城分析仪器制造有限公司；Western blot凝胶成像系统(Biorad GelDoc XR)购自美国Bio-rad公司。

1.3 细胞培养人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞由中国医学科学院血液学研究所熊冬生教授馈赠，培养于含10% FBS的RPMI-1640完全培养基中，放置于37 ℃、含5%CO2的培养箱。……