沈亚楠 谷 江 张永春 罗浩鸣

靶向药物在靶向抑制肾癌细胞时，肾癌细胞会产生一定的抵抗作用，导致药物的抑制效果逐渐减弱，但具体的抵抗机制尚未明确[1]。研究发现肾癌细胞中有STC-1蛋白的存在[2]。STC-1即斯钙素蛋白1，是最早在鱼类体内发现的一种糖蛋白激素，主要调节体内钙磷代谢[3]。STC-1以浓度依赖的方式刺激线粒体钙转运[4]。有研究指出，STC-1调节钙稳态的过程可能参与肾癌细胞对靶向药物的抵抗[5]。

所谓钙稳态是指细胞内液和细胞外液的离子钙水平稳定[6]。钙稳态是影响肿瘤细胞增殖和存活的重要因素[7]。索拉菲尼能够抑制肿瘤血管生成，引起肿瘤细胞缺氧，容易导致细胞内Ca2+超载，造成细胞损伤，而STC-1可能是一种抗凋亡和致癌因子，所以创新性地将STC-1调控钙稳态引入到肾癌细胞抵抗靶向药物的研究中，观察这种抵抗作用是否与STC-1调节钙稳态相关，或能为逆转肾癌细胞的耐药性提供新的思路[4，8]。

材料与方法

1.主要材料与仪器：1640培养基、青链霉素混合液、PBS(磷酸缓冲盐溶液)购自美国Hyclone公司；胎牛血清、0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA购自美国Gibco公司；MTT试剂盒购自凯基生物体；DMSO(二甲基亚砜)购自美国AMRESCO公司；索拉菲尼购自德国拜耳公司；总RNA提取试剂盒购自美国Fermentas 公司；ELLSA试剂盒购自美国R&D公司；9孔板、15ml及50ml离心管购自康宁公司；酶标仪(elx808)购自美国Thermo公司；低速离心机(SC-3612型)购自中佳公司；Fura-2 AM钙离子探针购自碧云天生物技术研究所；人肾癌GRC-1细胞购自上海弗雷堡生物公司。

2.培养液的配制：在50ml的离心管中加入500μl的青霉素、链霉素混合物、5ml的胎牛血清以及1640培养基，制备含有1%青霉素链霉素和10%胎牛血清的1640培养液。……