梁婷　　黄慧艳　　雷先华　　李荣

[摘要] 目的 探討子宫内膜癌的微卫星不稳定性与PD-L1表达的相关性及临床意义。 方法 选取2016年1月至2018年12月在我院病理库中搜集所有行手术治疗切除子宫的内膜癌标本共120例，采用免疫组化的方法标记错配修复蛋白MLH1、MSH2、PMS2和MSH6，检测其表达水平，以（+）和（-）记录各抗体表达情况。采用免疫组化的方法标记PD-L1蛋白，以（+）和（-）记录抗体的表达情况。统计分析120例子宫内膜癌患者的微卫星状态与临床病理特征、PD-L1表达的相关性。 结果 120例子宫内膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分别占总数的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年龄、体质量指数、病理分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移之间比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。MSI患者的子宫内膜癌组织、免疫及肿瘤细胞PD-L1表达阳性率分别为50.0%、42.5%，明显高于MSS患者的26.3%、17.5%，差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关分析显示，子宫内膜癌的微卫星不稳定性与PD-L1表达显著相关（P<0.05）。敏感性、特异性和准确性分别为50.0%（20/40）、73.8%（59/80）、65.8%（79/120）。 结论 子宫内膜癌的微卫星不稳定性会上调子宫内膜癌组织、免疫及肿瘤细胞PD-L1表达，可以作为PD-1/PD-L1途径免疫治疗子宫内膜癌的生物标志物。

[关键词] 子宫内膜癌;微卫星不稳定性;PD-L1表达;相关性;临床意义

[中图分类号] R737.33          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2021）11-0122-03

Correlation between microsatellite instability and PD-L1 expression in endometrial carcinoma and its clinical significance

LIANG Ting1   HUANG Huiyan2   LEI Xianhua1 LI Rong1

1.Department of Pathology，Ganzhou Cancer Hospital in Jiangxi Province， Ganzhou 341000， China; 2.Department of Pathology，the People′s Hospital of Yudu County in Jiangxi Province，Yudu 342300，China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between microsatellite instability （MSI） and PD-L1 expression in endometrial carcinoma and its clinical significance. Methods A total of 120 cases of endometrial carcinoma specimens from the pathological database of our hospital from January 2016 to December 2018 were collected. The mismatch repair proteins MLH1， MSH2， PMS2 and MSH6 were labeled by the immunohistochemistry method，and their expression levels were detected. The expression of each antibody was recorded by（+）and（-）. The expression of PD-L1 protein was labeled by the immunohistochemistry method， and the expression of antibody was recorded by （+） and （-）. The correlation between microsatellite status （MSS） and clinicopathological features and PD-L1 expression in 120 patients with endometrial carcinoma was analyzed statistically. Results Among 120 patients with endometrial carcinoma，there were 40 cases of MSI and 80 cases of MSS， accounting for 33.3% and 66.7% of the total respectively. There were no statistically significant differences between all patients with MSI and MSS in age， body mass index，pathological stage，degree of tissue differentiation， depth of muscle infiltration and lymph node metastasis（P>0.05）. The positive rates of PD-L1 expression in endometrial carcinoma tissue，immunity and tumor cells in patients with MSI were 50.0% and 42.5%， which were significantly higher than those of 26.3%， 17.5% in patients with MSS， with significant difference（P<0.05）. It was shown by Spearman correlation analysis that MSI in endometrial carcinoma was significantly correlated with PD-L1 expression（P<0.05）. The sensitivity，specificity and accuracy were 50.0%（20/40），73.8% （59/80） and 65.8%（79/120）， respectively. Conclusion MSI in endometrial carcinoma can up-regulate the expression of PD-L1 in endometrial carcinoma tissue， immunity and tumor cells， which can be used as a biomarker of PD-1/PD-L1 immunotherapy for endometrial carcinoma.

[Key words] Endometrial carcinoma; Microsatellite instability; PD-L1 expression; Correlation; Clinical significance

子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，晚期患者疗效不佳。有文献报道，存在MSI的散发性内膜癌患者预后不良[1]。部分国外学者认为[2]，MSI可作为免疫治疗反应的生物标志物，使晚期子宫内膜癌患者接受抗PD-1治疗，并从中获益。本研究统计分析了我院病理库中2016年1月至2018年12月所有行手术治疗切除子宫的内膜癌标本共120例的临床资料，旨在通过检测子宫内膜癌的MSI表型和PD-L1表达情况，并分析其相关性及表达的意义，最终探讨存在MSI的子宫内膜癌患者是否更适于接受PD-1/PD-L1抑制剂的治疗，将新的依据提供给晚期患者的个体化精准治疗，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集我院病理库中2016年1月至2018年12月所有行手术治疗切除子宫的内膜癌标本共120例，选取肿瘤组织及癌旁（距离至少1 cm）组织各一块，统一搜集出组织蜡块，并记录相关患者基本信息和临床病理信息。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：①均经手术病理检查确诊为子宫内膜癌者;②均符合子宫内膜癌的诊断标准[3]者;③术中均清除淋巴结者。排除标准：①有子宫内膜癌以外的肿瘤病史者;②有其他部位肿瘤者;③术前接受过放化疗及激素等治疗者。

1.3 方法

将收集的组织蜡块切片、烤片后，随机分批次上全自动免疫组化仪，采用半自动的方法，人工滴加一抗，实验完成后洗片、封片、镜检。所有病理切片由两名不参与本研究的病理医生判读，整张切片>10%目标细胞阳性即判定为阳。采用免疫组化的方法标记错配修复蛋白MLH1、MSH2、PMS2和MSH6，检测其表达水平，以（+）和（-）记录各抗体表达情况。MSI-H（高频度微卫星不稳定性）：四个错配修复蛋白2个或以上表达缺失;MSI-L（低频度微卫星不稳定性）：四个错配修復蛋白中只有一个发生表达缺失;MSS（微卫星稳定性）：四个错配修复蛋白均未见表达缺失[4]。按照以上标准将免疫组化结果进行分类、整理。采用免疫组化的方法标记PD-L1蛋白，以（+）和（-）记录抗体的表达情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析。计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验;采用Spearman秩相关分析进行相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 120例子宫内膜癌患者的微卫星状态与临床病理特征的相关性分析

120例子宫内膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分别占总数的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年龄、体质量指数、病理分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2 120例子宫内膜癌患者的微卫星状态与PD-L1表达的相关性分析

120例子宫内膜癌患者中，MSI患者的子宫内膜癌组织、免疫及肿瘤细胞PD-L1表达阳性率分别为50.0%、42.5%，明显高于MSS患者的26.3%、17.5%，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

子宫内膜癌是常见的女性生殖道恶性肿瘤，无论是我国还是欧美国家，子宫内膜癌的发病率均逐年增高[5]。对于病灶局限于子宫的早期患者，手术即可达到较好的治疗效果，但当患者已存在转移病灶或疾病复发时，传统的治疗方法疗效有限，患者预后通常较差[6]。为此类患者探索新的治疗方法已成为当务之急。

近年来，临床不断深入研究了多种恶性肿瘤，在肿瘤的发生中，多基因突变发挥着重要作用，其中包括抑癌基因突变、错配修复系统缺失[7]。错配修复基因（MMR genes）在细胞内负责修复碱基错配，复制错误阳性或微卫星不稳定性（MSI）会在错配修复基因突变的情况下发生，增加整个基因组不稳定性，从而引发抑癌基因、癌基因的一系列改变，促进各种肿瘤的发生[8]。错配修复基因是一组看家基因，高度保守，一方面在基因组稳定性发挥着重要作用，另一方面还在DNA复制的忠实性中发挥着重要作用[9]。现阶段，PMS2、MSH2、MSH6、MLH1是较为常见的错配修复基因。由于子宫内膜细胞具有频繁的DNA复制，因此碱基错配率及MMR基因突变率高[10]。MMR系统修复功能会在MMR基因突变的情况下发生障碍，进而造成MMR蛋白失表达，无法对DNA复制过程中细胞缺失和错误渗入进行修复，促进染色体交换不均、复制错误、滑链错配等现象的发生，从而改变微卫星DNA长度，促进MSI的发生，影响正常细胞的增殖调控，促进广泛肿瘤易感的出现，并以较快的速度将一些癌基因、抑癌基因中的突变积累起来，进而促进肿瘤形成[11]。近年来，临床不断深入研究了肿瘤微环境、肿瘤细胞免疫调节信号通路、靶向免疫检查点的治疗等免疫治疗给肿瘤患者带来了新的希望[12]。

T细胞活化是肿瘤免疫的核心。PD-1（PDCD1，即程序性死亡受体1）是一种免疫共抑制受体，在T细胞表面发挥着重要作用，主要在活化的T细胞表面表达。PD-1结合其配体程序性死亡受体配体1（PD-L1，PDCD1LG1）后会对T细胞的增殖、分化进行抑制，同时使T细胞处于无功能状态，从而对机体抗肿瘤免疫反应进行抑制。PD-1/PD-L1抑制剂治疗是指将PD-1/PD-L1负性调节免疫的作用消除，解除抑制免疫检查点的作用，从而恢复效应T细胞对肿瘤细胞进行特异性识别与杀伤的功能[13]。有研究报道[14]，PD-1、PD-L1抗体能够持久性消退晚期肿瘤，使患者能够对不良反应耐受，保持稳定的病情。在复发及难治性非小细胞肺癌、黑色素瘤等疾病的治疗中，PD-1/PD-L1抑制剂的应用前景极为广阔。目前有关免疫检查点抑制剂在子宫内膜癌中的应用相关临床研究并不多。部分学者认为[15]，MSI可作为免疫治疗反应的生物标志物，使晚期子宫内膜癌患者接受抗PD-1治疗，并从中获益。

前期实验已发现，在散发性子宫内膜癌中有相当一部分患者存在MSI表型，本研究旨在通过检测子宫内膜癌的MSI表型和PD-L1表达情况，并分析其相关性及表达的意义，最终探讨存在MSI的子宫内膜癌患者是否更适于接受PD-1/PD-L1抑制剂的治疗，为晚期患者的个体化精准治疗提供新的依据。本研究结果显示，120例子宫内膜癌患者中，MSI 40例，MSS 80例，分别占总数的33.3%、66.7%。MSI和MSS患者的年龄、体质量指数、病理分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。MSI患者的子宫内膜癌组织、免疫及肿瘤细胞PD-L1表达阳性率均显著高于MSS患者，差异有统计学意义（P<0.05）。Spearman相关分析显示，子宫内膜癌的微卫星不稳定性与PD-L1表达显著相关。敏感性、特异性和准确性分别为50.0%（20/40）、73.8%（59/80）、65.8%（79/120），提示微卫星不稳定表型与PD-L1表达存在相关性，存在微卫星不稳定表型的患者均伴有PD-L1高表达。

综上所述，子宫内膜癌的微卫星不稳定性会上调子宫内膜癌组织、免疫及肿瘤细胞PD-L1表达，可以作为PD-1/PD-L1途径免疫治疗子宫内膜癌的标志物。

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（收稿日期：2020-10-26）