潘竞, 覃远汉, 蒋玲, 席志杨, 涂立, 蹇淑娟

广西医科大学第一附属医院儿科(广西南宁 530021)

肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis，RIF)是肾间质由大量成纤维细胞聚积形成，是各种慢性肾脏病(chronic kidney disease，CKD)进展到终末期的共同病理表现，与肾功能损害密切相关，RIF发展的程度越高预示着肾功能损害程度越重。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator aetivated receptor gamma，PPARγ)是转录因子核受体家族成员之一，参与细胞分化、脂质代谢、炎症、免疫调节等机体多种功能调节，且与糖尿病、肥胖、动脉粥样硬化等疾病密切相关[1-2]。Lu等[3]研究发现，PPARγ的激活在改善RIF的发展和治疗CKD方面具有潜在的价值。为此，我们采用重亚硫酸盐扩增子测序(BiSulfite Amplicon Sequencing，BSAS)的方法，进行PPARγ甲基化与CKD患儿RIF状态的关系分析，从表观遗传学范畴探讨PPARγ甲基化可能参与RIF发生、发展的机制。

1 资料与方法

1.1 对象与分组 选取广西医科大学第一附属医院儿科病房2014—2019年经肾穿刺活检术确诊的各类CKD患儿共75例，其中，病理表现为RIF(RIF组)33例；非RIF(非RIF组)42例。选择本院体检中心正常健康儿童51例作为正常对照组(正常组)。本研究已获本院伦理委员会审核批准，同时患儿监护人或患儿本人知情同意。

1.2 主要试验材料 血液基因组DNA提取试剂盒(TIANGEN，中国)；NanoDrop 2000(Thermo Fisher Scientific)；MiSeq v.3试剂盒(Illumina，San Diego，CA，美国)；EZ DNA甲基化-GOLD试剂盒；HT1缓冲液(Illumina，San Diego，CA，美国)；Qubit 2.0(Invitrogen，美国)；Gnome Size Selector磁珠(Huijie，Wujiang，中国)；安捷伦2100生物分析仪(Agilent Technologies)；Illumina MiSeq台式测序仪；Miseq平台(Illumina，San Diego，CA，美国)。

1.3 DNA亚硫酸氢盐转化和亚硫酸氢盐特异性PCR 收集各组患儿外周静脉EDTA抗凝血约2 mL，按照DNA提取试剂盒说明书提取患儿血液基因组DNA，应用重亚硫酸氢盐甲基化转化修饰后进行PCR扩增，上游引物5′-TGTTAAAAAGGGTAAAGGTTTTGAG-3′，下游引物5′-CTCTACTAATTTATAAAACCCAAAATAA-3′，片段长度367 bp。……