麦荣嘉 黄研 马丹娟 邓文喻

广东省妇幼保健院，广州 510010

肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）是一种无细胞壁、形态呈高度多样性、能通过除菌滤器、能在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。MP是呼吸道感染常见的病原体，全年均可致病，以秋冬季节发病为主，有一定流行趋势，不同地域、季节发病率不一，好发于儿童、青少年［1］。MP感染具有较高的发病率和临床意义，但仍是一种被低估的疾病［2］。为了更好地了解MP的流行状况，分子生物学分型是监测和调查的有效方法。目前，快速循环聚合酶链反应（rapid-cycle polymerase chain reaction polymerase chain reaction，Rapid-Cycle PCR）能快速、高效地对MP进行临床分型［3］。近年来，获得性呼吸窘迫综合征毒素（community acquired respiratory distress syndrome toxin，CARDSTX）的发现，为MP感染引发免疫损伤提供有力证据［4-5］。目前国内对MPCARDSTX罕有报道［6］，而CARDSTX基因序列的研究未见报道。因此，本研究拟检测本院2019年儿童急性呼吸道感染患者MP的感染率，并用Rapid-Cycle PCR对MP临床菌株进行P1基因分型，了解本地区MP的流行情况；同时运用PCR扩增CARDSTX基因，比对分析标准株M129型与临床株的CARDS基因序列，了解临床MP的CARDSTX基因序列保守性。

1 材料与方法

1.1 材料 实验保存的标准菌株M129型（ATCC29342）。支原体液体培养基CM403购自美国Invitrogen公司。

1.2 MP临床菌株的分离培养和DNA提取

1.2.1 临床MP的鉴定 本实验通过收集2019年本院临床诊断为急性呼吸道感染的住院患儿咽拭子标本165例，使用Real-time PCR鉴定MP临床菌株。使用达安基因公司的肺炎支原体核酸检测试剂盒DNA，严格按试剂说明书进行操作。

1.2.2 MP临床标本的处理以及培养［7］对于鉴定为MP阳性标本的前提下，收集相关患儿的痰液标本或者支气管灌洗液标本进行MP菌株培养分离。……