冯 涛 ， 闫 爽 ， 薛 原

(东北林业大学野生动物与自然保护地学院 ， 黑龙江 哈尔滨 150040)

大肠杆菌被认为是衡量食品粪便污染的一个指标，其耐药性和基因可以通过食物链转移给人类，这对公共卫生有潜在的风险[1]。β-内酰胺类药物是目前在临床上最为广泛使用的抗生素之一，超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrum-β-lactamases, ESBLs)是一种由质粒介导传播的可以水解β-内酰胺类药物的水解酶[2]，由于抗生素的广泛甚至不正当使用，导致多种ESBLs的基因型产生，包括TEM、OXA、CTX-M和SHV等[3]。近年来，国外已有关于产ESBLs菌株引起疾病暴发流行的报道[4]，我国对这类大肠杆菌的检出率也在急剧增加[5]。

本试验检测和分析了东北地区不同狐源养殖场中ESBLs基因分布情况，旨在调查狐源中产ESBLs大肠杆菌的分子流行情况，为东北地区狐源养殖场的临床用药、预防和控制ESBLs基因的传播和流行提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 菌株 大肠杆菌质控菌株(编号为ATCC25922)，由中国兽医药品监察所提供；试验菌株，于2016—2019年分离自东北不同地区狐养殖场，并分离纯化和鉴定为大肠杆菌，共224株。

1.2 试剂 药敏纸片，购自杭州天和微生物试剂有限公司；质粒小量提取试剂盒、DNA 片段凝胶回收试剂盒，均购自爱思进生物技术有限责任公司；水解酪蛋白琼脂培养基(Mueller-Hinton,MH)、琼脂糖，均购自西陇科学股份有限公司；10×Buffer、dNTP、Taq酶、DL-2 000 marker、6×Loading Buffer、pMD18-T 载体、感受态细胞E.coliDH5α，均购自TaKaRa公司。

1.3 ESBLs耐药表型的测定 ESBLs耐药表型的检测采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)[6]推荐的双纸片法进行判定。初筛试验中，将试验用大肠杆菌均匀涂布于MH培养基，采用纸片扩散法，满足头孢他啶(CAZ)的抑菌直径≤22 mm或头孢噻肟(CTX)的直径≤27 mm，样本即可能为产ESBLs的菌株。……