刘兴艳，涂家洁，朱承华，赵佳菲，张晓芝

（宁波职业技术学院 化学工程学院，浙江宁波 315800）

虎杖为蓼科蓼属植物虎杖的干燥根茎和根。虎杖主要含蒽醌类、黄酮类、芪类及酚类等的化合物，具有多种药理活性，包括抗菌、抗炎、抗病毒、降血脂、抗氧化、改善心血管等。其中黄酮类、二苯乙烯类及蒽醌类具有显著的降脂作用，被认为是虎杖中降脂作用有效组分[1]。

PCSK9是一个脂质调节蛋白。PCSK9是当前最热的降脂靶点之一，在高脂血症、糖尿病及心血管疾病等中有着重要作用。研究发现家族遗传性高胆固醇血症发生的重要原因之一是PCSK9突变基因[2]。同时，在动物实验揭示了PCSK9在调节胆固醇水平上的作用，PCSK9与常染色体显性家族性高胆固醇血症有关的基因。

本文以降脂相关中药虎杖为研究对象，利用PCSK9磁珠亲和结合HPLC技术快速特异检测抑制PCSK9成分，为寻找PCSK9直接作用成分的筛选提供方法参考，同时对虎杖药效物质基础研究有一定推动作用。

1 实验部分

1.1 药品与试剂

虎杖（宁波中医院门诊部）；Tris-base（Sigma公司）；咪唑（美仑生物）

1.2 设备

高效液相色谱仪（美国 安捷伦）；超声细胞破碎仪（宁波新芝生物科技有限股份有限公司）；凝胶成像（BIO-RAD）；电子天平（德国Sartouris）。

1.3 试剂配制

（1）Wash Buffer：20mmol/L Na3PO4，500mmol/L NaCl，0～40mmol/L Imidazole，pH 7.4。

（2）Elution Buffer：20mmol/L Na3PO4，500mmol/L NaCl、400mmol/L Imidazole，pH 7.4。

（3）100mmol/L PBS：称取2.964g NaH2PO4·2H2O，85g NaCl，30g Na2HPO4·12H2O，双蒸水H2O定容至1L，调pH为 7.4。其他离子强度的PBS溶液按比例稀释即可。

（4）SBC-115076溶液：取适量SBC-115076，以DMSO配成100mmol/L溶液，即得。

2 实验方法

2.1 条件优化

（1）孵育时间考察。PCSK9磁珠于离心管中（加入1mL，PBS重悬，重复操作一次。磁性分离，加入含1μL SBC-115076溶液，PBS溶液 1mL，将离心管放置于旋转混合仪上，室温分别旋转孵育5min、10min、15min及20min，考察不同孵育时间下阳性药的吸附量。……