韩仲谋 夏 杰 陈 静 张其梅

(三峡大学 第一临床医学院[宜昌市中心人民医院] 神经内科， 湖北 宜昌 443003)

癫痫是一种常见的神经系统慢性发作性疾病。我国流行病学调查资料显示，癫痫患病率为0.90‰～4.80‰，农村年发病率为25/10万，城市为35/10万[1]。由于癫痫的发病机理极为复杂，至今尚未完全明确，故其治疗缺乏突破性进展。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases，MAPKs)是目前发现的最重要信号转导蛋白之一，它在细胞增殖、分化、生长、死亡过程中起着关键作用[2]。研究表明，MAPK在癫痫患者中表达上调，提示该蛋白可能具有致病作用[3]。p38/活化转录因子2(activated transcription factor 2，ATF2)轴可促进中枢神经系统小胶质细胞的炎症活化，从而加重脑内神经元损伤，成为治疗中枢神经系统疾病的潜在靶点[4, 5]。本研究以氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型为基础，通过观察海马神经元中MAPK家族成员p38及其下游转录因子ATF2的活化规律，探讨p38信号通路对海马癫痫神经元损伤的影响及相应的神经保护调节机制。

1 材料与方法

1.1 试剂和设备

主要试剂和设备：匹罗卡品、氯化锂购于美国Alexis公司，抑制剂SB203580、二甲亚枫(dimethyl sulfoxide，DMSO)购于美国Sigma公司，鼠源p38抗体、鼠源p-p38抗体购于美国Santa Cruz Biotechnology公司，兔源ATF2抗体、兔源p-ATF2抗体购于美国Abcam公司，辣根过氧化物酶标记二抗购于北京中杉金桥生物技术有限公司，BCA蛋白定量试剂盒、SDS-PAGE凝胶试剂盒购于西安晶彩生物科技有限公司。垂直电泳槽、凝胶成像系统购于美国Bio-Rad公司，PVDF膜购于美国MILLIPORE公司，BX43型双目生物摄像显微镜购于日本Olympus公司。

1.2 实验动物

实验动物：清洁级成年雄性SD大鼠36只，单体质量为(200±20)g，购自三峡大学医学院动物实验中心，动物合格证号：No.42010200000426；……