孟春芹,刘先勇

(南京医科大学附属江宁医院中西医结合科,南京 211100)

肿瘤细胞耐药包括原发性耐药和获得性耐药。多数细胞耐药为获得性耐药，是在临床抗肿瘤药物治疗过程中诱导而逐渐产生的。其发生机制十分复杂，故目前仍无有效逆转方法。目前，化疗已成为大肠癌综合治疗中常用并且有效的方法。然而，随着现代化疗药物种类的增加，使用频次的增多、时间的延长，导致许多肠癌细胞产生耐药，使临床中化疗效果大大降低，所以，寻找新的天然抗肿瘤药物迫在眉睫。本课题组的前期实验已经证实，竹节香附素A(RA)能够抑制人结肠癌细胞株HCT116、HT29的增殖[1-2]。本实验旨在探索RA能否逆转HCT116/L-OHP对奥沙利铂的耐药性，并探讨其可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

RPMI-1640细胞培养基(含双抗)及胎牛血清(FBS)购自美国Hycolon公司；RA购自中国药品生物制品检定所，批号：141113； 奥沙利铂购自美仑生物，批号：O0801AS；四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自美国Sigma 公司，批号：M2128；Annexin-V/PI凋亡试剂盒购自美国BD公司，批号为556547；逆转录试剂盒TaKaRa DDR037A、Power SYBR Green购自日本TaKaRa公司；β-actin、caspsae-3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、P-gp、IκB-α、p65一抗及二抗，购自美国CST公司。

1.2 细胞株及培养

人结肠癌耐药细胞株HCT116/L-OHP购自上海博谷生物公司；细胞培养于含10% FBS的RPMI1640及培养基中，并用低浓度奥沙利铂(12.5 μg/mL)维持，置于37 ℃，含95% 空气、5% CO2、完全饱和湿度的培养箱中培养，于实验前两周停用奥沙利铂。

1.3 MTT实验检测细胞存活率

(1)分别取对数生长期的HCT116、HCT116/L-OHP细胞株，以6 000、8 000/孔接种于96孔板中，每组设6个副孔，培养24 h。加入不同浓度的RA(1、2、4、8 μmol/L)和奥沙利铂(12.5、25、50、100、200、400 μg/mL)培养24 h，再加入MTT溶液(5 mg/mL)20 μL/孔。……