吕星星， 陶 妍,2*， 谢 晶,2， 钱韻芳,2

(1．上海海洋大学 食品学院，上海 201306；2．上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306)

β-防御素(β-defensin)是大多数生物免疫系统中的重要蛋白质免疫因子，属于阳离子型的小分子抗菌肽，最初在牛的气管黏膜上皮细胞中被发现，具有抗金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)和大肠埃希菌(Escherichiacoli)的活性[1]。鱼类来源的β-防御素基因最早发现于斑马鱼(Daniorerio)、红鳍东方鲀(Takifugurubripes)和青斑河豚(Tetraodonnigroviridis)[2]中，之后从团头鲂(Megalobramaamblycephala)[3]、点带石斑鱼(Epinepheluscoioides)[4]和大西洋鳕鱼(Gadusmorhua)[5]等鱼种中分离到β-防御素基因。近年来，关于β-防御素的重组DNA表达研究时有报道，例如，有两位学者分别以点带石斑鱼和斑马鱼的β-防御素基因为研究对象，实现了其在毕赤酵母中的重组DNA表达[6-7]；此外，团头鲂和大西洋鳕鱼中的β-防御素基因也在大肠埃希菌BL21中成功表达[3，5]。然而，上述研究在构建重组菌株时转入的均是含单拷贝基因的常规表达载体，绝大多数重组菌株产β-防御素的能力有限，因而表达量并不高。基于重组DNA技术的外源蛋白质表达受多种因素的影响，诸如目的基因的核苷酸序列特性(密码子偏爱性、AT含量等)、表达载体在宿主染色体上的整合位点、目的基因拷贝数、宿主菌株的生命力、培养条件和甲醇利用表现型等，而这些因素中，以基因拷贝数尤为重要[8-10]。增加基因拷贝数的有效途径包括目的基因的串联和多拷贝表达盒载体的构建，前者是将目的基因通过特定连接点或者结构连接点，使多个相同基因组成串联体，在同一启……