冯亚岚， 李玥珂， 任 阳， 唐丽萍， 黄 荣， 袁 磊， 杨 健*

(1.川北医学院 基础医学院，江苏 南充 637000；2.川北医学院附属医院 感染科，江苏 南充 637000)

包膜(envelope, E)蛋白是成熟黄病毒结构中唯一的糖蛋白，对病毒毒力起着重要调控作用[1]。大量文献报道E蛋白突变能够减弱黄病毒的神经毒力[2-3]。与登革病毒、乙脑病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)一样，寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)隶属于黄病毒科黄病毒属[4]。自1947年由乌干达寨卡森林发现以来[5]，ZIKV引起多次爆发流行，世界卫生组织已将其列入危害人类健康的主要病原体之一[6]。目前由于ZIKV感染仍无有效治疗方法，使得疫苗研发迫在眉睫。本课题组从事嵌合病毒疫苗的研究，前期研究发现，嵌合病毒JEV/ZIKV(MR766)具有较强的小鼠脑内神经毒力，而JEV/ZIKV(PRVABC59)对小鼠无明显脑内神经毒力，结合Li等[7]的研究，推测是MR766中E蛋白的氨基酸突变所致。通过与弱毒株氨基酸序列比对发现，E蛋白中存在多个氨基酸突变，其中T120A突变是其第一位氨基酸突变[8]，并且位于E蛋白结构域II(EDII)，该区已被证实对病毒的复制有重要意义[9]，由此推测E120很可能是影响病毒毒力的重要位点。本研究以嵌合病毒JEV/ZIKV为骨架构建其突变病毒JEV/ZIKV (T120A)，探索 E120位点突变对嵌合病毒小鼠脑内神经毒力的影响，为嵌合病毒的进一步减毒以及寨卡病毒的减毒机制提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒、菌株、细胞、病毒及实验动物 质粒pACNR-JEV-5′(含有乙脑疫苗株nt 1～3 450序列)、质粒pACNR-JEV-3′(含有乙脑疫苗株nt3 445～10 977序列)、pACNR-JEV/ZIKV-5′(乙脑疫苗株prM/E编码序列被寨卡病毒相应部位序列取代)由本实验室构建并保存；大肠埃希菌感受态TOP10、BHK21均为本室保存；……